内容正文:
灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏其抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是:病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
灭活、化学提纯
多种抗原
注射多种抗原
多克隆抗体
从血清中分离
产量低
特异性差
病毒
如何抗体解决特异性差和产量低的问题?
恶性增殖的骨髓瘤细胞
产生抗体的B淋巴细胞
细胞工程是指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。
第2节 动物物细胞工程2
第2章细胞工程
蚕丝
默而识之,学而不厌
生命观念
结合具体实例,以流程图的形式表示单克隆抗体的制备过程。
运用结构与功能观,理解动物细胞融合技术的原理和过程。
说明单克隆抗体的特点及应用。
科学探究
社会责任
三 动物细胞融合技术
知识回顾:
必修一 第三章 第1节
三 动物细胞融合技术
小资料:动物细胞技术融合简史
细胞融合的现象早在19世纪就已经被发现了。1838年在肿瘤中观察到了细胞融合后产生的多核细胞。此后在有病毒感染的病理组织如天花脓包周围、受水痘损害的皮肤、麻疹患者的扁桃体中陆续发现多核细胞。1875年首次观察到了脊椎动物(蛙类)血液细胞的融合现象。虽然很早就发现了细胞融合的现象,但受当时科技发展水平的限制,人们对这一现象并没有给予足够的重视。
直到20世纪50年代末,日本学者冈田善雄 (Okada, 1928—2008)发现仙台病毒(HVJ流感病毒)可以促进腹水癌细胞(ETC)进行细胞融合,至此,才真正开启了人们对细胞融合技术的探索。
三 动物细胞融合技术
19世纪30年代,科学家曾在肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。
病人体内病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
三 动物细胞融合技术
灭活病毒诱导法
①灭活:是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏它们的抗原结构。
仙台病毒
紫外线
灭活
丧失感染活性(不感染细胞)
保留融合活性(能诱导细胞融合)
②原理:病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
三 动物细胞融合技术
1. 概念
动物细胞融合技术就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞遗传信息的。
细胞膜具有一定的流动性。
物理法:电融合法
化学法:聚乙二醇(PEG)
生物法:灭活病毒诱导法
——动物细胞融合特有
方法
原理
结果
意义
突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。
三 动物细胞融合技术
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞融合前的处理方法
诱导细胞融合的方法
细胞融合成功的标志
意义
主要用途
细胞膜具有一定的流动性、
植物细胞的全能性
细胞膜具有一定的流动性
用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞
聚乙二醇(PEG)融合法、电融合法、离心法;高Ca2+-高pH融合法
聚乙二醇(PEG)融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
再生出细胞壁
细胞核的融合
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种
突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能
获得完整的杂种植株
主要用于制造单克隆抗体
三 动物细胞融合技术
3. 应用
①至今,种间、属间、科间,甚至动物和植物之间细胞融合都已获得成功。
②研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
③为制造单克隆抗体开辟了新途径。
资料 :2016年,《ACS Synthetic Biology》杂志上报道一个日本科学家团队,他们将拟南芥细胞与人类HT1080细胞融合,杂交细胞中产生出了人类/植物融合染色体,同时还能稳定存活、增殖,进行基因表达的案例。
四 单克隆抗体及其应用
B细胞1
抗体1
产生
能产生抗体1,但不能大量增殖
英国科学家米尔斯坦
德国科学家科勒
极富创造性的实验方案
骨髓瘤细胞
能无限增殖, 但不能产生抗体
四 单克隆抗体及其应用
会有几种细胞融合方式?杂交瘤细胞具有什么特点?
单克隆抗体制备过程中为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白?
如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体?
教材P48-49
产生特定抗体的杂交瘤细胞的获得需要几次筛选?各自筛选的方法和目的是什么?
四 单克隆抗体及其应用
浆细胞
能产生抗体
骨髓瘤细胞
能无限增殖