1.2 微生物的基本培养技术（第2课时）-2023-2024学年高二生物同步教学讲解课件(人教版2019选择性必修3）

第二节 微生物的培养技术及应用 第二课时 微生物的基本培养技术 水 碳源 氮源 无机盐 消毒 灭菌 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 1.培养基的配制 2.无菌技术 3.微生物的纯培养 培养物： 在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微 生物的群体。 该菌落是纯培养物吗？ 由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物（≈单菌落） 获得纯培养物的过程就是纯培养。 微生物的纯培养常用方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法。 一、 微生物的纯培养 探究·实践 酵母菌的纯培养 1.实验目的 学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板 学会进行无菌操作 尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落 分散的微生物在适宜的________________表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的_____________。 关键 菌落 固体培养基 子细胞群体 铜绿假单胞菌 酵母菌 枯草芽孢杆菌 菌落特征： 大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。 鉴定菌种的重要依据 探究·实践 酵母菌的纯培养 2.实验原理 2.实验原理 将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 关键 平板划线法 关键 稀释涂布平板法 平板划线法 通过接种环在固体培养基（平板）表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到由单个微生物繁殖而形成的单菌落。 2.实验原理 7 3.实验器材 酵母菌培养液 提供接种 用的酵母菌 马铃薯 葡萄糖(或蔗糖) 蒸馏水 琼脂 配制酵母菌固体培养基 天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱、恒温培养箱 4.实验步骤 制备培养基 接种分离酵母菌 培养酵母菌 第1步：制备培养基 4.实验步骤 马铃薯 (200g) 去皮 马铃薯块 切块 加水 (1000mL) 煮沸 软烂 马铃薯 纱布过滤 滤液 加葡萄糖/蔗糖 (20g) 加琼脂 加水定容 (1000mL) 酵母菌培养基 ①配制培养基 ②灭菌 酵母菌培养基 培养基 —— 高压蒸汽灭菌 转移 包牛皮纸 锥形瓶 加棉塞 皮筋勒紧 放入高压蒸汽灭菌锅中(100kPa、121℃) 灭菌15~30min ②灭菌 培养皿——干热灭菌 5~8套 培养皿 几层牛皮纸包紧 灭菌2h 放入干热灭菌箱(160~170℃) ③倒平板 ③倒平板 培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板 拔出锥形瓶的棉塞 将瓶口迅速通过火焰 用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养皿(10~20mL)倒入培养皿，立即盖上皿盖 待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置 翻转 第2步：接种和分离酵母菌 分离的方法 平板划线法 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作， 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 经过数次划线后培养，可以分离到单菌落。 单菌落 平板划线过程 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红 在火焰旁冷却接种环。同时拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞 将试管口通过火焰 在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 平板划线过程 将试管口通过火焰，并塞上棉塞 在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖 平板划线过程 灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。 ▲注意： ①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次； ②划线首尾不能相接； ③每次划线前接种环进行灭菌； ④划线后，培养皿倒置培养。 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右 (培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异) 的恒温培养箱中培养24 ~ 48h。 培养酵母菌 19 5.实验结果分析与评价 1. 在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有,说明了什么? 在未接种的培养基表面应该没有菌落生长， 如果有，说明培养基被杂菌污染了。 2.在接种酵母菌的培养基上,你是否观察到了单菌落?这些菌落的颜色、形状和大小是否一致?如果你观察到了不同形态的菌落,你能分析出可能是由哪些原因引起的吗? 如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。 思考讨论 ①加琼脂的目的是什么?为什么要用玻璃棒搅拌？ 作为凝固剂；防止琼脂糊底导致烧杯破裂。 ②在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？ 在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞, 在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用 ③培养皿能否用高压蒸汽灭菌？ 不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌. 思考讨