1.2.2 微生物的选择培养和计数（第2课时）-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修三

1.2微生物的培养技术以应用 二微生物的选择培养和计数 从社会中来 PCR需要耐高温的DNA聚合酶，到哪里寻找？你有什么思路吗？ 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 从社会中来 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌( Thermus aquaticus)，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应(PCR)。 【思考】为什么水生栖热菌能从热泉中被筛选出来呢？ 这是因为水生栖热菌能在 70-80 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 想一想，以上例子给我们在分离纯化微生物带来什么启示？ 一、选择培养基 1.实验室中筛选特定微生物的原理： 人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2.选择培养基的定义： 一、选择培养基 长出各种各样的细菌 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 具有抗氨苄青霉素能力的菌落 想一想，如何证明培养基加入氨苄青霉素后是否筛选出了一些菌落？ 一、选择培养基 3.选择培养基配方的设计： (1)添加某些化学物质。 例：培养基中加入抗生素——筛选出酵母菌、霉菌等真菌 培养基中加入高浓度食盐——筛选金黄色葡萄球菌 (2)提供特定培养条件 例：70～80℃的高温——水生栖热菌 选择培养基配方的设计 一、选择培养基 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］是现代农业生产中一种重要的氮肥,施入土壤后，会被土壤中的某些细菌(能合成脲酶)分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。 讨论1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源。 讨论2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 一、选择培养基 3.选择培养基配方的设计： (1)添加某些化学物质。 例：培养基中加入抗生素——筛选出酵母菌、霉菌等真菌 培养基中加入高浓度食盐——筛选金黄色葡萄球菌 (2)提供特定培养条件 例：70～80℃的高温——水生栖热菌 (3)以特定物质作为唯一碳源或氮源 例：培养基中尿素为唯一氮源——筛选出尿素分解菌 培养基中纤维素为唯一碳源——筛选纤维素分解菌 【问题1】若想知道土壤中有多少能够分解尿素的细菌，该如何操作？ 二、微生物的选择培养 计数：测定分解尿素的细菌的数量 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 【问题2】由于土壤细菌的数量庞大，那么怎么获得想要得到的特定微生物的纯培养物呢？ 对土壤进行充分稀释后，再将菌液涂布到制备好的选择培养基上。 稀释涂布平板法 ——将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 梯度稀释菌液 涂布平板 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。 二、微生物的选择培养 稀释涂布平板法 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在选择培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 二、微生物的选择培养 稀释涂布平板法 培养:待涂布的菌液被选择培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃培养1～2d。 观察:在适宜稀释度的平板上可以分离得到单菌落。 二、微生物的选择培养 1.稀释涂布平板法除可以用来分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。 三、微生物的数量测定 (1)原因： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 (2)计数方法： 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 每克样品活菌数=（菌落数/菌液体积）*稀释倍数 三、微生物的数量测定 (3)影响因素： 在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30-300、适于计数的平板。 (4)减少误差的操作： 在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 样品的稀释度 1.稀释涂布平板法除可以用来分离微生物外，也常用来统