2024届高三生物一轮复习课件第十单元第33讲考点二 微生物的选择培养和计数

第十单元　生物技术与工程 第33讲 发酵工程 微生物的基本培养技术 01 微生物的选择培养和计数 02 传统发酵技术应用 03 发酵工程及其应用 04 目录 考点二　 微生物的选择培养和计数 02 在微生物学中，将允许 生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 特定种类的微生物 抑制 阻止 思考 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照 基础培养基 选择培养基 问题：如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？ （1）选择培养基 1、微生物的选择培养 以尿素为唯一氮源的培养基 ①利用营养条件进行选择培养 不加含碳有机物的无碳培养基 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌 分离自养型微生物 ②在培养基中加入某种化学物质 加入青霉素的培养基 加入高浓度食盐的培养基 分离得到酵母菌、霉菌等 分离得到金黄色葡萄球菌 ③改变微生物的培养条件 无氧环境下培养 厌氧型微生物，兼性厌氧型 筛选出能分解尿素的细菌 （1）选择培养基 1、微生物的选择培养 ①一系列稀释操作 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g土样 （2）稀释涂布平板法 1、微生物的选择培养 常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 1×10 微量 移液器 取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却8~10s后，再进行涂布。 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入恒温箱培养。 ①滴加菌液 ②涂布器消毒 ③涂布器灭菌 ④涂布平板 （2）稀释涂布平板法 ①计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌； 通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 选择30-300个菌落的平板进行计数； 每个稀释度至少取3个平板取其平均值； 统计的菌落往往比活菌的实际数目低； 统计的结果一般用菌落数而不是活菌数来表示； 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 ①计数原则： 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 （1）间接计数法——稀释涂布平板法 2、微生物的数量测定 ③计算公式： 每g样品中的菌落数＝ （C÷V）×M M代表稀释倍数 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) 例1：某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是 ( )（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 （234÷0.1）×106=2.34×109 答 B （1）间接计数法——稀释涂布平板法 2、微生物的数量测定 例2：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ （80+90+100）/3 0.1 × 105 =9 ×107个 ③计算公式： 每g样品中的菌落数＝ （C÷V）×M M代表稀释倍数 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) （1）间接计数法——稀释涂布平板法 2、微生物的数量测定 ①原理：利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数 ②缺点： ①不能区分死菌与活菌； ②个体小的细菌在显微镜下难以观察； ③不适于对运动细菌的计数； ④需要相对高的细菌浓度。 ③优点： 快速直观 2、微生物的数量测定 （2）显微镜直接计数——计数板计数法 （1）实验目的： ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 （2）实验原理： 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 （3）操作步骤： 制备培养基 土壤取样 样品稀释与取样涂布 微生物的培养与观察 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数