1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得课件-2023-2024学年高二下学期生物浙科版（2019）选择性必修3

由不同微生物个体繁殖后代组成的大片菌落 单菌落：由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团 ? =菌落? 分离纯化 分离纯化 单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法 第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 接种：微生物进入培养基质的过程。 自然接种：牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。 人为接种：挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或在培养基斜面连续划线用于保存菌种（接种环）。 一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化 接种环 涂布器 平板 1.平板划线法 2.稀释涂布平板法 （一）单菌落分离方法 1．平板划线法 (1)原理 ： (2)工具： (3)划线方式： 接种环划线的过程中，菌液被逐渐分散，最终出现单个细菌，形成单菌落。 连续平行划线、扇形划线、多次连续平行划线 接种环 思考1：不同划线方式下单菌落一般出现在划线的什么位置？ 思考2：不同划线方式下接种环何时灼烧？ 1.平板划线法 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 多次连续平行划线法 思考：若完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？ 平板划线操作中三种灼烧的目的不同 1.蘸取菌液前灼烧 2.每次划线前灼烧 3.划线操作结束后灼烧 避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。 杀死残留菌种，保证每次划线接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 用________蘸菌液____次，在____________表面划线，下一次划线应从上一次划线的______开始。每次划线前接种环要____ ，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的 。若共划线五次，接种环要烧灼____次。另外：每次划线都不能与之前的线条_____；不能将最后一次划线与第一次划线相连 重叠 6 末端 1 灼烧灭菌 单菌落 注意：1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。 2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。 接种环 固体培养基 思考2：不同划线方式下接种环何时灼烧？ （4）过程： 避免灭菌后接种环的高温烫死菌种 ①一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； ②二是存留在划破处的单个细胞会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 防止皿盖上的水珠落入培养基，影响菌落形成，造成污染。 例1、在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种 （甲）、培养结果（乙）如图所示。 有关叙述错误的是 （ ） Ａ．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 Ｂ．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 Ｃ．接种过程中至少需要对接种环灼烧 ５ 次 Ｄ．甲中 ａ 区域为划线的起始位置 例2、下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是 （ ） Ａ．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 Ｂ．单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法 Ｃ．培养基大多使用高压蒸汽灭菌法灭菌 Ｄ．在第二次划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液 D C 用 将菌液进行一系列的 ，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的单菌落。 梯度稀释 涂布 倒置培养 ①用移液器吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1稀释液，依此方法得到10-5 ~ 10-7稀释液。 ②用移液器取0.1ml菌液，加在固体培养基上。再将涂布器灭菌冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。 ③将培养皿倒置，恒温箱中培养 无菌水 2．稀释涂布平板法 (1)原理 ： (2)工具： (3)过程： 梯度稀释 涂布器 无菌水 涂布分离： 划线分离： 方法简单，菌落较难分开 操作复杂，菌落更易分开 例题：（ 温州十校联合体期初联考）有些细菌 可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。 某同学欲从 污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。 （１）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。 （２）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种， 即 和 。 常用的操作工具分别是 和 。 （３）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小， 分解圈大