内容正文:
第2节 微生物的培养技术及应用
第2课时 微生物的选择培养和计数
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目 标 素 养
1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物,阐明选择培养基的原理,形成生物与环境相适应的生命观念。
2.概述稀释涂布平板法和显微镜直接计数法是测定微生物数量的常用方法。尝试用稀释涂布平板法进行土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。
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知 识 概 览
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一、选择培养基
1.筛选微生物的原理:人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2.选择培养基。
(1)概念:在微生物学中,允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
(2)实例:利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基,从土壤中分离出分解尿素的细菌。此细菌能合成脲酶,脲酶催化尿素分解产生NH3,NH3可作为细菌生长的氮源。
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二、微生物的选择培养
1.方法:稀释涂布平板法。
2.操作步骤:
将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀
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取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中,依次等比稀释
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取0.1 mL菌液,滴加到培养基表面
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将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中
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将涂布器放在火焰上灼烧,待酒精燃尽、涂布器冷却后,再进行涂布
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用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿,使涂布均匀
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待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37 ℃的恒温培养箱中培养1~2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落
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三、微生物的数量测定
1.稀释涂布平板法。
(1)作用:除可以用于分离微生物外,也常用来统计样品中
活菌的数目。
(2)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
(3)方法:通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
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(4)原则:为了保证结果准确,一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值。
(5)结果:统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
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2.显微镜直接计数法。
(1)分类:利用特定的细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下观察、计数。
(2)结果:一般是活菌数和死菌数的总和。
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微思考 为探究枯草杆菌能否用于番茄灰霉病的生物防治,培养过程中抽样检测活菌数量时,应采用稀释涂布平板法还是显微镜直接计数法?请说明理由。
提示:稀释涂布平板法。用稀释涂布平板法在培养基上观察到的一个菌落通常来源于样品稀释液中的一个活菌,而显微镜直接计数法的统计结果一般是活菌数和死菌数的总和。
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四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.土壤取样。
(1)土壤要求:酸碱度接近中性的潮湿土壤。
(2)取样环境:在城市,常见的是公园里、街道旁、花盆中的土壤;在农村,则容易收集到农田或菜园里的土壤。
(3)取样部位:距地表3~8cm的土壤层。
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2.样品的稀释。
(1)测定土壤中细菌的数量时,一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。
(2)选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证能从中选择出菌落数为30~300的平板进行计数。
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3.微生物的培养与观察。
(1)培养:不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2 d。
(2)观察。
①观察方法:每隔24 h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
②记录菌落的特征,包括菌落的形状、大小和颜色等。
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