内容正文:
分组练(5)
生物技术与工程A组
1.(10分)水污染是全球性的环境问题,微生物降解
良反应,现利用转基因山羊孔膘生物反应器生产
是水污染治理的有效手段之一。聚乙 醇(PVA)
人溶菌醇。回答下列问题:
是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有
(1)人溶菌融基因孔脉特异表达载体的构建:对人
机物,PVA分解菌能产生PVA分解PVA
溶菌梅进行蛋白质测序来推测
序
PVA与碑作用时能产生蓝绿色复合物,当PVA
列,从而获得人溶菌晦基因的cDNA(某种生物发
被分解时蓝绿色复合物消失,形成白色透明斑。
育某个时期的mRNA经逆转录产生的互补
请回答下列问题:
DNA),通过这种方法得到的目的基因没有
(1)要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌
,必须借助载体,实现其在受体细胞中的
应采用以
为唯一碳源的选择
扩增和表达。使用
梅处理人溶菌酸
培养基,实验中还应设置对照组。将菌液稀释相
基因和基因表达载体,获得重组DNA分子。
同的倍数,对照组培养基上生长的菌落数目应明
(2)转基因山羊成纤维细胞的制备和鉴定:使用显
显
(填“多于”或“少于”)选择培养基
微操作仪将重组表达载体注入雕性山羊成纤维细
上的数目,从而说明选择培养基具有筛选作用。
胞中。
和核酸分子杂交技术能精准
(2)要测定土壤稀释液中微生物的数目,可在显微
鉴定受体细胞中是否转入人溶菌基因。
镜下用
计数板直接计数。若将
(3)转基因奶山羊的克隆:对卵母细胞供体注射
100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释
,使其超数排卵获得卵母细胞,将
10 倍后,取0.1mL.稀释液均匀涂布在选择培养
处理后的转基因细胞核移人去核卵母细胞中,电
基表面,测得菌落数的平均值为160个,空白对照
脉冲使其
。之后肠胎体外培养
组平板上未出现菌落,则100mL原菌液中有
至。
阶段再移植到受体羊子宫中,使
PVA分解菌
个。该方法的测量值
其奸足月分娩。
与实际值相比一般会
(填“偏大”“偏
(4)重组人溶菌晦的获取和抑菌效果检测:收集转
小”或“相等”),原因是
基因山羊孔汗,使用离子交换层析实现重组人溶
菌梅的分离。为检测重组人溶菌梅对大肠杆菌和
(3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌,培
金黄色葡萄球菌的抑制作用,进行了相关实验,用
养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养
法将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌
物质外,还需要加入
。要比较不同
液分别接种到牛肉膏蛋自陈培养基上,并在上面
菌株降解PVA能力的大小,用含相同PVA浓度
均匀摆放藉有重组人溶菌藤溶液的无菌滤纸圆
的上述培养基来培养不同菌株,一定时间后,通过
片,之后
(填“正置”或“倒置”)在
测定
37C恒温培养箱中培养。培养后发现,接种有金
来确定不同菌株降解PVA能力的大小。
黄色葡萄球菌的培养基上的滤纸片周围的
2.(10分)溶菌可以催化细菌细胞壁水解,引起细
更大,说明该种溶菌对金黄色葡萄球菌
菌裂解,在临床上可作为消炎药,治疗细菌感染
的抑制作用更好。
人溶菌梅是人内源性蛋白质,不会对人体产生不
生物学第58页(共62页
3.(10分)注射用生长激素主要用于内源性生长激素
4.(10分)科研人员构建了可表达1-V5融合蛋白的
缺乏所引起的儿童生长障碍,还适用于重度烧伤。
重组质粒并进行了检测,该质粒的部分结构如图
生长激素缺乏症等,临床常用的重组人生长激畜
甲所示,其中V5编码序列表达标签短肤V5。回
是通过基因工程、发醉工程生产的。图1表示生
答下列问题:
启动子
长激素基因及其上的限制商藤切位点,图2是质
因v5编码序列将止子
粒的结构示意图。请回答下列问题:
R
FcoRI
R2
SrrI
EcoR I
引物物
注:F1、F2、R1、R2表示引I物。
1物1物2
抗挫白抗体抗V5抗体
11
乙
引|物5引物6
生长激素基国
|物/物8
(1)与图甲中启动子结合的晦是
HlII
HllI
除图甲中标出的结构外,作为载体,质粒还需具备
的结构有
AHanll!
(答出2种
环素
即可)。
氢青霉素
抗
,icok1
抗性因
(2)构建重组质粒后,为了确定]基因连接到质粒
中且插入方向正确,需进行PCR检测,若仅用一
(1)生产重组人生长激素时,利用PCR技术可获
对引物,应选择图甲中的引物
:已
取和扩增生长激素基因,扩增时需要的必要条件
知]基因转录的模板链位于b链,由此可知,引物
除模板、原料、ATP、以外,至少还需要三个条
F与图甲中了基因的
(填“a链”或
件,即液体环境、适宜的
和
“b链”)相应部分的序列相同。
(2)若要扩增出生长激素基因并构建重组质粒,选
(3)重组质粒在受体细胞内正确表达后,用抗]蛋
择的引物应是图1中的
白抗体和抗V5抗体分别检测相应蛋白是否表达
(3)