内容正文:
第2章 第2节 动物细胞工程
第2课时:动物细胞融合技术与单克隆抗体
学习目标
目标
01
02
03
结合具体实例,以流程图的形式表示单克隆抗体的制备过程。
(科学探究)
运用结构与功能观,理解动物细胞融合技术的原理和过程。(生命观念)
说明单克隆抗体的特点及应用。
(社会责任)
2
植物体细胞杂交
植物细胞融合
植物组织培养
温故而知新
植物体细胞杂交技术跨越不同种植物之间生殖隔离的屏障,克服远缘杂交不亲和的障碍,培育出新的作物类型。
人细胞
鼠细胞
红色荧光染料标记的膜蛋白
绿色荧光染料标记的膜蛋白
细胞融合
人鼠杂交细胞
37°
培养40min
细胞融合
1970年,动物细胞融合实验
请同学们快速阅读课本P48页,回答以下问题:①动物细胞融合的概念;②动物细胞融合的原理;③诱导融合的方法;④融合的结果;⑤动物细胞融合的意义和运用。
一、动物细胞融合技术
1.概念:
使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2.结果:
形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
3.原理:
细胞膜具有一定的流动性
4.诱导融合的常用方法:
PEG融合法
电融合法
灭活病毒诱导法
5.意义:
突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能
一、动物细胞融合技术
6.应用:
(1)细胞融合技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开辟了新途径。
相关信息
1.什么是病毒的灭活?
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程:
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
↓
细胞膜被病毒颗粒穿通
↓
细胞膜连接
↓
细胞核融合,形成杂交细胞
灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力,但是并不破坏病毒的抗原结构。
病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
灭活病毒诱导细胞融合的原理
相关信息
处理方法
诱导手段
结果
原理
请同学们看图对比动物和植物细胞融合的异同:
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞融合前的处理方法
诱导细胞融合的方法
细胞融合成功的标志
主要用途
意义
细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性
细胞膜具有一定的流动性
用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞
电融合法、离心法;聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+-高pH融合法
PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
再生出细胞壁
细胞核的融合
获得完整的杂种植株
主要用于制造单克隆抗体
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种
突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能
动物细胞融合技术与植物体细胞杂交的比较
缺陷:产量低、纯度低,且抗体的特异性差、灵敏度低。
不能无限增殖产生大量抗体
动物体内
抗原
刺激
浆细胞
抗体
筛选单一B细胞
增殖分化
抗原不纯
抗原不纯
早期获得抗体的方法
二、单克隆抗体及其应用
为解决这一难题,科学家进行了多年的研究和探索。
人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的浆细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每个浆细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体,必须用克隆单个B淋巴细胞形成细胞群。
每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
单一B淋巴细胞
细胞群
选择
克隆
产生
大量纯度高特异性强的抗体
B淋巴细胞不可能无限增殖
如何获得大量、单一的抗体?
遗憾的是体外培养时,一个B淋巴细胞不能无限增殖如何解决这一问题?
B淋巴细胞不能无限增值
资料2:
二、单克隆抗体及其应用
1:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的
思考讨论
2:有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备
癌细胞
动物细胞融合
二、单克隆抗体及其应用
动物细胞培养
单克隆抗体
动物细胞融合
杂交瘤细胞
骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
1975年,英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上,充分发挥想象力,设计了一个极富创造性的实验方案:
一个极富创造力的方案
资料3:
既能迅速大量增殖,又能产生专一抗体
二、单克隆抗体及其应用
1975年,米尔斯坦和柯勒
1984年,诺贝尔生理学或医学奖
二、单克隆抗体及其应用
1.单克隆抗体
由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。
可大量增值的融合细胞
可大量增值的骨髓瘤细胞
单克隆抗体
(由克隆细胞产生的单一抗体)
B淋巴细胞
结合图2-16: 米尔斯坦和