1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得-教学课件-2023-2024学年高二下学期生物浙科版（2019）选择性必修3

微生物的计数 高中微课程 一、实验目的 了解不同微生物计数的操作流程，掌握血球计数板的计数和操作规范，重点掌握血球计数法和平板活菌计数法。 二、实验器材： 酵母菌贮用培养液、大肠杆菌贮用培养液、血细胞计数板、细菌计数板、比浊计（或比色计）、有螺旋盖的试管、显微镜等。 2、仪器： 恒温培养箱、恒温摇床、离心机、搅拌器、冰箱等。 三、实验原理： 计数板计数的原理通过对计数室中的微生物数量的读取，计算原溶液中的微生物数量；平板菌落计数的原理是每个菌落大部分是由个单细胞生长繁殖而来，根据菌落的数量推测出微生物的数量。 血球计数法 1、实验原理： 血球计数器是一特制的厚载玻片，上面刻有一定面积的 方格，将盖玻片盖上后，由于两者之间存在着距离使之形成一定容积的小室。滴入待测样品后，使样品均匀充满小室，在显微镜下计算小室内的菌数，换算成单位体积的样品中所含的菌数。 2、血球计数板的构造 盖玻片 0.1mm 1/400mm2 计数室体积 =(1×1×0.1)mm3 = 10-4cm3 血球计数板 3、血球计数法的步骤 1、取待测啤酒酵母菌液，摇匀。并做适当稀释（以每个中格内20左右为宜）。 2、取洁净干燥的血球计数器，盖上盖玻片，用滴管吸取少量菌液沿盖玻片边缘滴入一小滴，菌液自行渗入计数室，静止片刻，使菌液均匀充满每小室。 3、先在低倍镜下找到计数室，注意光线不能太亮，再转到高倍镜下，取5个中格进行计数（每个中格取4个小格）。 计数时注意调节焦距，使不同焦距的菌体都计入，在线上的菌，数上不数下，数左不数右。 4、菌液浓度计算 菌液浓度（菌数/ml)=N×25×104×稀释倍数 其中N为每中格内菌数的平均值。 1. 每个血细胞计数板的正中央有2个计数区。各9个大方格（中央为红细胞计数区，4个角为白细胞计数区） 2. 红细胞计数区共400个小方格。 ①大方格：_____个。长、宽各1 mm。1个大方格液体体积＝1 mm2×0.1 mm＝0.1 mm3(0.1×10-3mL)。 ②中方格：红细胞计数区又用双线分成______(或16)个中方格。 ③小方格：每个中方格再用单线划分为______(或25)个小方格。所以一个计数区共有 个小方格。 (4)计数时的几个注意点 ①滴加菌液要避免菌液滴到盖玻片上并防止 ， 以免影响计数结果。先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入， ②对有25个中方格的红细胞计数区可采用_________法对酵母细胞进行计数。 9 25 16 400 产生气泡 “五点取样” 酵母细胞进行计数。 ③在计数每一小方格中的细胞数时，为了避免重复计数压在小方格边缘线上细胞的数目，应_____________________________。 ④为了保证结果的可信度，消除误差，应对同一红细胞计数区中的细胞数进行_____ 次计数后取平均值，再按比例进行换算。 小思考：显微镜直接计数法有什么缺点吗？ 【答案】不能区分死菌和活菌；计数结果较实际活菌偏大 ⑤用血细胞计数板对酵母菌计数时，吸取培养液前要轻轻振荡几次试管的目的是 。 “数上不数下”“数左不数右” 3 使酵母菌分布均匀，计数准确 平板活菌计数法 1、实验原理 微生物在固体培养基上形成的单菌落，一般认为是由一个细胞繁殖而来，及一个菌落代表一个细胞。计数时，将待测菌样做一系列稀释，再取一定稀释度一定量的稀释液接种到平板上，使其均匀分布。经培养后，生长成单菌落，由菌落数推算出单位体积菌液的活菌数。 2、平板活菌技术的步骤 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 菌悬液 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 每皿约倒入15ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 沙保培养基 待凝后倒置于28℃恒温培养48h后计数。 （选择菌落数在50～100个左右的平板计数） 菌液浓度计算 菌液浓度（菌数/ml) =菌落数×稀释倍数×5 注：只数浓度合适的两个平板取平均值 2. 3. 4. 5. 注意事项 1. 过程的无菌操作 稀释分离法中熔化后的培养基倒平板前温度控制 稀释法中用吸管取试管中液体的顺序从稀到浓 取样前注意摇匀待测菌液 取样时都要无菌操作。注意取菌液时移液管不要 碰到火焰，以免烧死菌体 6. 血球计数器要洁净干燥，滴入菌液时在盖玻片与 载玻片间不能有气泡 7. 血球计数时显微镜光线不宜太亮 思考题 １.从两种方法计数得出的菌液浓度是否一 致？分析误差产生的原因，由此比较一下 两者的优缺