2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体（第2课时）课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

能不能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢？ 第二章 细胞工程 第二节 动物细胞培工程 2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体 一 动物细胞融合技术 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的杂交细胞 细胞膜具有一定的流动性 1.概念： 4.结果： 2.原理： 3.诱导方式 物理法：电融合法 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活病毒诱导法 与植物原生质体融合的方法相同 动物细胞融合特有 3 人细胞 鼠细胞 红色荧光染料标记的膜蛋白 绿色荧光染料标记的膜蛋白 细胞融合 人鼠杂交细胞 37° 培养40min 细胞融合 知识回顾 1970年，动物细胞融合实验 证明：细胞膜具有一定的流动性 什么是动物细胞融合？ 阅读课本第48页 思考：19世纪30年代，科学家曾在肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？ 病人体内病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。 正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞 7、应用： 6、意义： 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 ①已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和 培育生物新品种等的重要手段。 ②特别是利用动物细胞融合技术发展起来的杂 交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。 一 动物细胞融合技术 5.过程 细胞膜融合 细胞核融合 细胞质融合 形成杂交细胞 融合完成标志 比较 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理     步骤 酶解法去 后，诱导 融合，形成 ，再经植物组织培养形成 。 分散成 后诱导细胞融合，形成 。 方法 聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2＋—高pH融合法、电融合法、离心法 PEG融合法、电融合法、 诱导法 标志 结果 形成____________ 形成 ，以生产细胞产品 意义 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 细胞膜的流动性 细胞的全能性 细胞膜的流动性 细胞壁 原生质体 杂种细胞 杂种植株 单个细胞 杂交细胞 灭活病毒 杂种植株 杂交细胞 再生出细胞壁 细胞核的融合 机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 抗体 二 单克隆抗体 传统抗体的制备方法 向动物体内反复 注射某种抗原 使动物 产生抗体 从动物血清中分离所需抗体 血清 特异性抗体多达百万种 缺点：产量低、纯度低、特异性差 抗体1 抗体2 抗体3 抗体4 抗原1 抗原2 抗原3 抗原4 B细胞1 B细胞2 B细胞3 B细胞4 刺激 刺激 刺激 刺激 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 1个B淋巴细胞 B淋巴细胞群 产生 （产量高、纯度高、特异性强） 大量单一抗体 克隆 如何解决？ 解决方案 1975年，米尔斯坦和科勒设计了一个极富创造性的试验方案： 米尔斯坦 【英国】 科勒 【德国】 杂交瘤细胞 可大量增殖的骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 单克隆抗体 (由克隆细胞产生的单一抗体） 二 单克隆抗体 既能迅速大量增殖，又能产生抗体。 由于发明了单克隆抗体的制备技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。 10 单克隆抗体的制备 原理 ①每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，但不能在体外无限增殖 ②小鼠骨髓瘤细胞能在体外无限增殖，但不能产生抗体 ③利用动物细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持亲代双方的特性，既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体 1.单克隆抗体制备过程中为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ 2.会有几种细胞融合方式？杂交瘤细胞具有什么特点？ 3.产生特定抗体的杂交瘤细胞的获得需要几次筛选？方法和目的分别是什么？ 4.如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？ 请阅读课本第48-49页，思考讨论回答以下问题 制备过程 培养骨髓瘤细胞 从脾中提取 多种B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 注射特定的抗原 获得产生特定抗体的B细胞 ①用特定抗原对小鼠进行免疫的原因？ B细胞1 B细胞2 B细胞3 B细胞4 骨髓瘤细胞 瘤B1 瘤B2 瘤B3 瘤B4 瘤瘤细胞 B1/2/3/4 BB 置于选择性培养基上培养 第一次筛选 多种杂交瘤细胞 融合的细胞（只考虑两两融合） 骨髓瘤细胞 自身融合 B细胞自身