2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-2026-2027学年高二下学期生物选择性必修3

2.2 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 动物细胞核移植 如果让动物细胞进行融合，与植物有哪些不同之处？ 无需去除细胞壁 全能性受限制，不能培育成新的动物个体 灭活病毒诱导细胞融合的原理? 原理：病毒表面的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 二、单克隆抗体的制备 1、抗体是怎样产生的？主要分布在哪？ 产生： B细胞受抗原刺激后，增殖分化为浆细胞，浆细胞合成并分泌抗体。 分布： （1）血清（主要） （2）组织液及外分泌液（如乳汁中，为新生儿提供抗体） 血清 （抗体主要分布部位） （1）传统抗体生产缺陷：产量低、纯度低，且特异性差 浆细胞 单克隆抗体 筛选单一B细胞 增殖分化 抗原 免疫过程 多种 抗体 1.早期获得抗体的方法 动物体内 抗原 刺激 动物血清中获取抗体 遗憾：B淋巴细胞不能无限增殖 怎样能得到既能无限增殖，又能产生特异性抗体的细胞? （2）动物体内产生的特异性抗体的种类超过百万种， 但每个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 米尔斯坦 科勒 大胆设想： B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （能产生抗体） （能大量增殖） 杂交瘤细胞 （既能产生抗体，又能大量增殖） 用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。 用特定的选择培养基进行筛选∶在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 多孔细胞培养板 阳性孔 (1)取出阳性孔培养液 将其稀释到每毫升10个细胞。 (2)如果在多孔板中每孔加0.1毫升，使每孔内落入一个细胞。 (3)根据检测的阳性结果再次进行克隆化。 对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。 从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。 如何获得大量“单克隆抗体”? 腹内培养相对于体外培养的优点：不需要特定的培养基，不需要严格控制环境条件。 两次 筛选 第一次筛选 第二次筛选 目的： 方法： 目的： 方法： 筛选出融合的杂种细胞(杂交瘤细胞 ) 这种杂种细胞既能无限增殖，又能产生专一性抗体。 HAT选择性培养基 在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。 筛选出分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选。 单克隆抗体 用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，从产生免疫反应小鼠的脾脏细胞中，他们得到了抗_________的抗体，这说明在小鼠的脾中形成了_______________细胞。他们又设法将鼠的__________细胞与脾脏细胞中产生的__________细胞融合，再用特定的__________培养基进行筛选。在该培养基上，_______________细胞和____________________的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。这种杂种细胞的特点是既能_______________，又能___________。对上述经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行_____________和____________，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后，将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，这样，从_____________或____________中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。 羊红细胞 相应的B淋巴 骨髓瘤 B淋巴 选择性 未融合的亲本 融合的具有同种核 迅速大量繁殖 产生专一抗体 克隆化培养 抗体检测 细胞培养液 小鼠腹水 4、单克隆抗体的应用 单克隆抗体最主要的优点在于它的____________、___________________________。 ①作为诊断试剂 由于单克隆抗体纯度高、特异性强，所以能准确地识别各种______物质的细微差异，并跟一定抗原发生_____________，因此，单克隆抗体在诊断的应用上，具有准确、高效、简易、快速的优点。 特异性强 灵敏度高并可大量制备 抗原 特异性结合 ②用于疾病检测 甲胎蛋白（AFP）是一种特异性较强的肿瘤标志物，用甲胎蛋白作为______免疫小鼠，制备__________________，并与含有放射性同位素的标记物连接，单克隆抗体携带放射性标记物通过血液可到达全身几乎所有组织。由于肿瘤细胞表面的______会和单克隆抗体特异性的结合，所以放射性同位素标记物就不断积累在______上。通过一定的显影技术就可以发现肿瘤所在。 抗原 抗AFP单克隆抗体 AFP 肿瘤 ADC的作用机制示意图 ① ADC ② ③ ④ 溶酶体裂解 释放药物 ⑤ 细胞凋亡 本堂小结 一.动物细胞工程 单克隆抗体制备过程中的相关考点总结 （1）该过程中应用到的技术_______________________________________ （2）原理_______________________________________ （3）注射特定抗原的目的______________________________________________ （4）诱导融合的方法____________________ 动物细胞特有的诱导融合方法为_______________________ 动物细胞融合、动物细胞培养 细胞膜的流动性、细胞增殖 从脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 灭活病毒诱导法 （5）第一次筛选的目的______________________ 第一次如何筛选___________________________ 筛选原理____________________________________________________ _____________________________ 筛选获得杂交瘤细胞 用特定的选择培养基进行筛选 在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长 （6）杂交瘤细胞的特点__________________________________ （7）第二次筛选的目的________________________________________________ 如何筛选_______________________________________ ____________ 选择抗体检测呈___性的杂交瘤细胞，即_____________ _____________ （8）抗体检测原理_______________________________________ 获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选） 分泌的抗体能与特定的抗原结合 抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定） 既能迅速大量增殖，又能产生抗体 （9）如何获取大量所需杂交瘤细胞__________________________________________ （10）如何获取单克隆抗体 ①体外培养___________________________ ②小鼠腹腔内培养_________________________ （11）单克隆抗体的优点_____________________________ _________________________________________________ 在体外条件下大规模培养（接种于培养液中）或注射到小鼠腹腔内增殖 从细胞培养液中获取 从小鼠腹水中获取 能准确地识别抗原的细微差异， 与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备 阳 单克隆抗体制备过程中的相关考点总结 $