2.2.2 动物细胞融细胞与单克隆抗体-2023-2024学年高二生物同步优选备课一点通（人教版2019选择性必修3）

问题情境 1.视频中了解到针对新冠肺炎真正的特效药是什么？ 2.这种特效药有着怎样的特点呢？ 针对新冠病毒的单克隆抗体。 这种单克隆抗体可以和新冠病毒特异性结合，准确定位、药效强、持续时间久，并且可以大量储备生产。 怎样获得产生特定抗体且增殖能力强的细胞？ 1 细胞膜具有一定的流动性。 一、动物细胞融合技术 2.原理： 4.诱导融合常用的方法： 1.概念： 3.结果： ⑴灭活？ ⑵灭活病毒诱导细胞融合的原理？ 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 6.意义： 7.应用： 5.过程： 细胞膜融合→细胞质融合→细胞核融合（实质） 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞融合前的处理方法 诱导细胞融合的方法 细胞融合成功的标志 主要用途 意义 细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性 用纤维素酶和果胶酶去细胞壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞 电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 杂种细胞再生出新的细胞壁 细胞核的融合 获得完整的杂种植株 主要用于制备单克隆抗体 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 抗原不纯 抗体不纯 缺陷：产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。 不能无限增殖产生大量抗体 动物体内 抗原 刺激 浆细胞 抗体 筛选单一B细胞 增殖分化 二、单克隆抗体及其应用 1.传统抗体制备方法及缺陷 科学家发现：体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上，每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体。 单 克 隆 抗 体 如何获得大量、单一的抗体？ 遗憾：体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖。 如何解决？ 二、单克隆抗体及其应用 抗体 一个 B淋巴细胞 细胞群 克隆 单克隆抗体：由单一B淋巴细胞克隆产生的特异性抗体。 5 二、单克隆抗体及其应用 单克隆抗体的制备思路 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 动物细胞融合 杂交瘤细胞 动物细胞培养 单克隆抗体 既能迅速大量增殖，又能产生抗体。 癌细胞 动物细胞融合 ⑴我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的? ⑵怎样使B细胞同时具备产生抗体和无限增殖能力？ 思考： 注射特定的抗原 从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞培养 多种B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 多种杂交细胞 从小鼠的脾脏中获取 2.单克隆抗体的制备过程 二、单克隆抗体及其应用 置于选择性培养基上培养 2 1 3 第一次筛选 多种杂交瘤细胞 融合的细胞 骨髓瘤细胞 自身融合 B细胞自身融合 杂交细胞 1 3 2 未融合的B淋巴细胞 未融合的骨髓瘤细胞 二、单克隆抗体及其应用 8 特定的选择性培养基（HAT培养基）的筛选原理 ①细胞合成DNA有两条途径，正常细胞内两种途径都有，若全合成途径被阻断，可以通过补救合成途径合成DNA；②骨髓瘤细胞不能合成转化酶和激酶，因此只能进行全合成途径；③全合成途径能被氨基喋呤（A）阻断；④次黄嘌呤（H）、胸腺嘧啶（T）是补救合成途径的原料；⑤无增殖能力的细胞在培养基中存活仅5～7天。将诱导融合后的细胞接种于HAT培养基后两周，则细胞生存状况及原因为： ①B细胞和B-B细胞死亡，能进行补救合成途径，但是无增殖能力； ②骨髓瘤细胞和瘤-瘤细胞死亡，两种途径均无法进行，无法合成DNA并增殖； ③杂交瘤细胞存活，能进行补救合成途径，能合成DNA并大量增殖。 第一次筛选:获得杂交瘤细胞 二、单克隆抗体及其应用 克隆化培养 抗体检测 第二次筛选 (抗原-抗体杂交技术) 多种杂交瘤细胞 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性细胞 二、单克隆抗体及其应用 10 阳性孔 将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养 （克隆化培养） 一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体 上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔 （抗体检测） 多孔细胞培养板 抗体检测板 分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞 第二次筛选:获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞 抗体检测的方法——抗原-抗体杂交法 克隆化培养和抗体检测 ★ 每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞 有限稀释法 侧面模拟图 克隆化培养一段时间 取上清液进行抗体检测 第二次筛选:获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞 注射到小鼠体内 体外培养 分离、提纯单克隆抗体 体内或体外培养 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 二、单克隆抗体及其应用 骨髓瘤细胞培养 杂交瘤细胞 单一抗体 阳性细胞 单克隆 抗体 细胞融合 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 筛选 克隆 抗体检测 ， 筛选 脾脏中获取