内容正文:
3.2.2 动物细胞工程(一)——动物细胞培养
课件创意@小狗啃骨头(刘永生)
课件引用图片仅限于教学用途
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治疗大面积烧伤时,通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说,自体健康皮肤非常有限,使用他人皮肤来源又不足,而且会存在免疫排斥反应。那么,怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢?能不能用自体皮肤的单个细胞培养出人的皮肤呢?
从社会中来
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动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞融合和细胞核移植等,其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础
动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和繁殖的技术
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动物细胞培养
所需的基本条件
一般来说,动物细胞培养(模拟体内细胞正常生长增殖的环境)需要满足以下条件:
3.2.2.1 动物细胞培养的条件
营养条件
其他条件
无菌、无毒的环境
适宜的温度、pH和渗透压
适宜的气体环境
糖类、氨基酸、无机盐、维生素……
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3.2.2.1 动物细胞培养的条件
营养
将细胞所需的营养物质按照种类和所需量严格配制而成的培养基,称为合成培养基
使用合成培养基时,(因为对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚)通常需要加入血清等天然成分
培养动物细胞一般使用液体培养基,也叫培养液
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3.2.2.1 动物细胞培养的条件
无菌、无毒的环境
无菌操作
定期更换培养液清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害(还可以避免培养液中营养物质缺乏)
温度、pH和渗透压
温度多36.5±0.5℃(哺乳动物)
pH 7.2~7.4
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气体环境
O2是细胞代谢必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH
通常将培养皿或松盖培养瓶置于95%空气+5%CO2的混合气体CO2培养箱中培养
3.2.2.1 动物细胞培养的条件
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放入CO2培养箱中培养
取动物组织
传代培养
制备细胞悬液
原代培养
转入培养液中
放入CO2培养箱中培养
分瓶培养
离心、收集细胞
用机械的方法,或用胰蛋白酶,胶原蛋白酶等处理的方法,将组织分散成单个细胞
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问题:
为什么不直接用动物组织进行细胞培养?
放入CO2培养箱中培养
取动物组织
传代培养
制备细胞悬液
原代培养
转入培养液中
放入CO2培养箱中培养
分瓶培养
离心、收集细胞
用机械的方法,或用胰蛋白酶,胶原蛋白酶等处理的方法,将组织分散成单个细胞
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问题:
用胰蛋白酶可以分散细胞,这说明细胞间的物质主要是什么?
为什么不用胃蛋白酶处理呢?
放入CO2培养箱中培养
取动物组织
传代培养
制备细胞悬液
原代培养
转入培养液中
放入CO2培养箱中培养
分瓶培养
离心、收集细胞
用机械的方法,或用胰蛋白酶,胶原蛋白酶等处理的方法,将组织分散成单个细胞
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说明:
非贴壁(依赖性)细胞(如癌细胞等)能够悬浮(不贴附介质)在培养液中增殖。
贴壁(依赖性)细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖,它们往往贴附在培养瓶瓶壁上,这种现象称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,就会停止分裂增殖,这种现象称为接触抑制。
培养瓶
营养液
培养细胞
培养瓶
营养液
培养细胞
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问题:
为什么原代培养的细胞分裂几次后,就会停止分裂?(分贴壁细胞和非贴壁细胞两种情况分析)
放入CO2培养箱中培养
取动物组织
传代培养
制备细胞悬液
原代培养
转入培养液中
放入CO2培养箱中培养
分瓶培养
离心、收集细胞
用机械的方法,或用胰蛋白酶,胶原蛋白酶等处理的方法,将组织分散成单个细胞
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问题:
原代培养的细胞停止增殖后,应该怎样处理才能更换培养液,继续传代培养?
放入CO2培养箱中培养
取动物组织
传代培养
制备细胞悬液
原代培养
转入培养液中
放入CO2培养箱中培养
分瓶培养
离心、收集细胞
用机械的方法,或用胰蛋白酶,胶原蛋白酶等处理的方法,将组织分散成单个细胞
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3.2.2.2 细胞培养的过程
机械方法
胰蛋白酶
胶原蛋白酶
成块组织中细胞和细胞靠在一起