第1章 第2节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（word教参）-【新课程学案】新教材2023-2024学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程（浙科版2019）

第二节　纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 1.概述微生物的分离和纯化的方法。 2．概述微生物数量的测定方法。 3．举例说明通过调整培养基的配方，可以有目的地培养某种微生物。 [主干知识梳理] 一、微生物的分离和纯化 1．平板划线法 类型 操作方法 连续 平行划线 从培养基上的一点出发，向左右连续划平行线至覆盖整个培养基表面 扇形划线 从培养基的一点出发，向多方向多次划线。每划一条线，要将接种环在酒精灯的火焰上灭菌，然后再次从同一起点变换方向划线 多次连续 平行划线 划线可分3～4次进行，将培养皿旋转一定角度后，不需再次蘸取菌种，只需在上一次划线的末端区域直接开始划线即可 2.稀释涂布平板法 (1)步骤：菌液的梯度稀释→各取不同稀释度的菌液0.1 mL加在固体培养基表面→用涂布器将菌液均匀涂布→培养。 (2)目标微生物的选择：根据菌落的形状、大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征选取目标微生物。 二、测定微生物的数量的方法 1．稀释涂布平板法 (1)减小随机误差：一是在保证能准确计数的前提下减小稀释度；二是将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算。 (2)计算方法：每毫升菌液中微生物细胞的数量＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。 2．显微镜计数法 (1)血细胞计数板 ①一个血细胞计数板含有2个计数区，每个计数区由9个大方格组成，以1 mm×1 mm×0.1 mm大方格为例，其液体体积为0.1_mm3。 ②计数区正中间的大方格为红细胞计数区，四角的四个大方格是白细胞计数区。 (2)酵母细胞计数 三、有目的地培养某种微生物 1．依据 (1)不同自然环境中生活着的微生物代谢类型不尽相同。 (2)许多微生物的代谢方式并不唯一。 2．方法 (1)调整培养基中营养物质的浓度及比例。 (2)有针对性地为目标微生物提供所需的生长条件。 3．选择培养基 (1)概念：在培养基中添加(或减去)某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其他微生物均不能生长的培养基。 (2)举例：添加青霉素——筛选对青霉素有抗性的细菌；不添加氮源——筛选固氮微生物。 4．能分解尿素的微生物的分离与计数 (1)实验原理 ①在以尿素为唯一氮源的选择培养基上生存的微生物能以尿素为氮源。 ②细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。 (2)培养基的对照：制备100 mL LB固体培养基和100 mL尿素固体培养基，分别培养土壤中的微生物，对菌落观察并计数。 (3)实验步骤 [预习效果自评] 1．判断下列说法的正误 (1)分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。(√) (2)对酵母菌计数时，用滴管吸取静置的培养液滴满血细胞计数板的方格区。(×) 提示：吸取培养液之前需要将培养液振荡以使酵母菌分布均匀，用滴管在盖玻片边缘滴加，让菌液渗满计数区。 (3)平板划线法简单并且可以用来计数，稀释涂布平板法使单菌落更易分开，但操作复杂些。(×) 提示：平板划线法只能用来分离细菌，不能用来计数。 (4)在培养基中加入酚红指示剂就可以筛选分解尿素的微生物。(×) 提示：能否实现筛选，与培养基中是否添加或控制特定物质有关，酚红为指示剂，只是用于鉴别分解尿素的微生物利用尿素的能力。 (5)采用多次连续平行划线法分离细菌时，每次划线都需要从最初的起点开始。(×) 提示：多次连续平行划线时，将培养皿旋转一定角度后，不需再次蘸取菌种，只需在上一次划线的末端区域直接开始划线即可。 2．平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述不正确的是(　 ) A．都需要用固体培养基 B．都通过操作进行了稀释 C．都要对接种针进行灼烧灭菌 D．都会在培养基表面形成单个的菌落 解析：选C　这两种接种方法都需要采用固体培养基，A正确；这两种接种方法都通过操作进行了稀释，最终得到单个细胞繁殖而成的肉眼可见的菌落，B、D正确；平板划线法和稀释涂布平板法都不是用接种针，平板划线法使用的是接种环，稀释涂布平板法使用的是涂布器，C错误。 3．图1甲、乙、丙、丁四幅图是倒平板操作过程图，图2是两种接种方法接种后培养的效果图，请回答下列问题： 图1 (1)请用图1文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：________________。 (2)甲、乙、丙中的灭菌方法是____________。 (3)丁中的操作需要等待________________才能进行。 图2 (4)获得图2中图A效果和图B效果的接种方法分别是________________和____________。 (5)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？________________