3.2基因工程的基本操作程序(第2课时)课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

5.表达载体上有哪些元件/部件？ 6.对目的基因和载体使用双酶切是为了： 2.原核生物与真核生物基因的区别： 4.与基因组文库相比，cDNA文库中的基因序列缺少： 8.复制原点、启动子、起始密码子分别起始哪些过程？化学本质分别是？ 7.通常用同种酶切割目的基因和载体是为了： 复制原点、启动子、目的基因、终止子、标记基因 防止目的基因和质粒自身环化， 防止目的基因反向连接 产生相同的末端 有无内含子/编码区是否连续 非编码区和内含子 复制、转录、翻译；DNA、DNA、RNA 1.基因工程的操作步骤包括哪几步？核心步骤是？ 3.获取目的基因的方法？ 基因组文库、cDNA文库、化学合成法、PCR 9.选择限制酶的注意事项： 1 2 3 4 6 5 4 5 1 2 3 4 1 2 1.选择产生不同末端的酶 2.酶切位点在启动子下游和终止子上游；不能切割载体的启动子、终止子、复制原点、标记基因 3.不能切割目的基因内部 选酶1和酶3 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入 微生物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 植物细胞 转化的概念:目的基因进入受体细胞，并且在受体细胞内维持稳定并表达的过程，称为转化。 Ca2+处理 -感受态 显微注射法 花粉管通道法、农杆菌转化法、基因枪法 3 将目的基因导入受体细胞 植物细胞 （2）农杆菌转化法 大型环状DNA （可转移的DNA） 农杆菌生活在土壤中的微生物，自然条件下可侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 转移到被侵染的细胞， 并且将其整合到该细胞的染色体DNA上 原理？ 伤口分泌酚类物质吸引农杆菌；农杆菌有Ti质粒，其中T-DNA可整合到植物细胞染色体上；目的基因插入T-DNA 4 目的基因 Ti质粒 表 达 载 体 农杆菌 植物细胞 植物细胞 染色体DNA 新性状植株 构建 转入 导入 插入 表达 将目的基因导入受体细胞 植物细胞 （2）农杆菌转化法 将目的基因导入受体细胞 植物细胞 （2）农杆菌转化法 1.构建重组Ti质粒需要的工具酶？ 2.为什么一定要插入T-DNA上？ 3.将基因表达载体导入农杆菌时应怎样处理农杆菌？ 4.受体细胞是普通的体细胞能否得到转基因植株？ 5.说明两次拼接和两次导入的对象和过程 ①转基因植物用 ； ②转基因动物用 (一般不能用体细胞)； 原因是： 。 ③微生物作为受体细胞的优点是 。 ④要合成糖蛋白、有生物活性的分泌蛋白等则受体细胞为 ， 原因是 ； ⑤一定不能用哺乳动物成熟的红细胞， 原因是 。 真核细胞 分泌蛋白等需内质网、高尔基体等的加工 受精卵有发育的全能性 无核，无器，不能合成蛋白质 体细胞或受精卵 受精卵 单细胞，繁殖快；遗传物质相对较少，易于培养操作 将目的基因导入受体细胞 总结-受体细胞的选择 7 目的基因的检测与鉴定 将表达载体导入受体细胞后，如何判断导入是否成功？ 即使导入成功，如何判断目的基因是否可以正常表达？ 首先： 其次： 接着： 最后： 还要： 标记基因 检测目的基因是否导入受体细胞 检测转基因生物的DNA是否插入目的基因 8 目的基因的检测与鉴定 检测转基因生物的DNA是否插入目的基因 变性 基因探针： 放射性同位素或荧光标记的单链DNA分子 待测DNA 杂交DNA分子 互补的核苷酸序列通过碱基配对形成稳定的杂合双链DNA分子的过程称为杂交。 方法：DNA分子杂交技术 9 目的基因的检测与鉴定 检测转基因生物的DNA是否插入目的基因 方法：DNA分子杂交技术 醋酸纤维素膜 10 目的基因的检测与鉴定 将表达载体导入受体细胞后，如何判断导入是否成功？ 即使导入成功，如何判断目的基因是否可以正常表达？ 首先： 其次： 接着： 最后： 还要： 标记基因 DNA分子杂交技术 检测目的基因是否导入受体细胞 检测转基因生物的DNA是否插入目的基因 检测目的基因是否转录出mRNA 11 目的基因的检测与鉴定 检测目的基因是否转录出mRNA 探针 转基因生物 的mRNA