2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体（教学讲义）-2023-2024学年高二生物下学期同步教学讲义（2019人教版选择性必修3）

第2章 细胞工程 第2节 二、动物细胞融合技术与单克隆抗体 学习目标 必备知识 一、动物细胞融合技术 二、单克隆抗体及其应用 拓展延伸 高考链接 模拟演练 1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。 2.概述单克隆抗体的制备过程。 一、动物细胞融合技术 1．概念：使 或 动物细胞结合形成 的技术。 2．原理： 。 3．诱导融合的方法： 、 和 等【诱导动物细胞融合特有的方法，灭活是指用物理或化学手段，使病毒或细菌失去 能力，但几乎不破坏他们的 结构】 ※灭活的病毒诱导原理:病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。 4.结果：形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的 细胞 5.意义：细胞融合技术突破了 的局限，使 成为可能。 6.应用： (1)成为研究细胞 、细胞 、肿瘤和培育 等的重要手段。 (2)用于制造 。 2、 单克隆抗体及其应用 1．传统抗体的获得 (1)方法：向动物体内反复注射某种 ，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需 。 (2)缺陷： 、纯度低、 。 2．单克隆抗体的制备 (1)制备原理： 和 ①B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞只分泌 种特异性抗体。但一个B淋巴细胞不能在体外培养条件下无限增殖。 ②骨髓瘤细胞特点：能在体外 ，但不能产生抗体。 ③杂交瘤细胞的特点：既能 ，又能产生足够数量的 。 (2)制备过程 ①免疫处理：给动物注射 进行免疫处理，获得能产生特定抗体的 。 ②诱导融合：将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞由 法、 法或 融合法诱导融合。 ③第一次筛选：用特定的 ，筛选出 。 ④第二次筛选：对杂交瘤细胞进行 和 ，获得足够数量的能 的杂交瘤细胞。 ⑤ 培养和 培养杂交瘤细胞。 3．单克隆抗体的优点 (1)能准确地识别 的细微差异。 (2)可以与特定抗原发生 结合。 (3)可以 制备。 4．单克隆抗体的应用 (1)用作 ，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。 (2)运载药物，如ADC( 偶联物)。 (3)直接用于 。 1． 第一次筛选获得杂交瘤细胞的方法 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。在培养基中加入氨基嘌呤，B淋巴细胞及同型融合细胞不能增殖，骨髓瘤细胞及同型融合细胞氨基嘌呤阻断不能增殖，只有杂交瘤细胞能无限增殖。 2.杂交瘤细胞的抗体检测和克隆化培养 融合后的细胞经特定的选择培养基筛选培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用96孔板培养，使每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需要进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为能产生特定抗体的杂交瘤细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 3.两次筛选的方法及目的 项目 第一次筛选 第二次筛选 筛选 原因 诱导融合后会得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞 由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞 筛选 方法 用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞(“B—瘤”细胞)才能生长 用96孔板培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群 筛选 目的 得到杂交瘤细胞 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 4．比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 融合前处理 除去细胞壁 使细胞分散开 相关酶 纤维素酶和果胶酶