1.2.2 微生物的选择培养和计数-【赢在微点】轻松课堂2023-2024学年新教材高中生物选择性必修3 生物技术与工程（人教版，多选）

二　微生物的选择培养和计数 课程目标 核心素养 1.学会用生物与环境相适应的观点理解选择培养的原理。 2.学会通过调整培养基的配方来有目的地培养某种微生物。 3.学会用多种方法测定微生物的数量。 科学探究　通过分离和计数土壤中分解尿素的细菌,进一步熟悉和掌握与微生物培养相关的技术和操作步骤。 科学思维　通过列表比较的方法,理解测定微生物数量的方法。 课前自主预习 　 知|识|梳|理 一、选择培养基 概念:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称为选择培养基。 二、微生物的选择培养 稀释涂布平板法。 (1)铲取土样,将样品装入纸袋中。 (2)系列稀释操作。 ①将10 g土样加入盛有90 mL 无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。 ②取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中,依次等比稀释。 (3)涂布平板操作。 操作示意图 操作 取0.1 mL的菌液,滴加到培养基表面 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧,待酒精燃尽后,冷却后,再进行涂布 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿,使菌液涂布均匀 (4)恒温箱培养:待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37 ℃的恒温箱中培养1~2 d。 (5)观察:在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 三、微生物的数量测定 1.常用方法:稀释涂布平板法。当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。 2.统计方法。 (1)总菌计数法。 ①操作过程:通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数为30~300、适于计数的平板。在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值。 ②统计菌落数往往比活菌实际数目少的原因:当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。 (2)显微镜直接计数法:利用特定的细菌计数板或血细胞计数板进行计数,此方法不能区分细菌的死活。 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.实验设计。 土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察 (1)土壤取样一般要铲去表层土,因为绝大多数细菌分布于距地表约3~8 cm的土壤层。  (2)样品的稀释:测定土壤中细菌的数量,一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。 (3)微生物的培养与观察。 ①培养:不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。 ②观察:每隔24 h统计一次菌落数目,最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。  2.操作提示。 (1)将涂布器从酒精中取出时,要让多余的酒精在烧杯中滴尽,然后再放在火焰上灼烧。 (2)取土样用的小铁铲和取样纸袋在使用前需要灭菌;称取土样要在火焰旁进行,稀释样品要在火焰旁操作。 (3)对平板和试管进行标记。 (4)对于耗时较长的生物实验,要事先规划时间,以便提高工作效率。 自|主|检|测 判断对错(正确的打“√”,错误的打“×”) (1)土壤中的细菌能分解尿素,是因为能合成脲酶。 (√) (2)常用平板划线法统计活菌数目。 (×) (3)统计的菌落数目往往比活菌的实际数目高。 (×) (4)在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁操作。 (√) (5)细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。 (√) 课堂合作探究 　 知识点一　筛选菌株的原理及统计菌落数目的方法 1.筛选菌株的原理。 (1)原理:人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。 (2)方法。 ①改变培养基中的营养成分。例如,缺乏氮源时可以分离固氮微生物;石油作为唯一碳源时,可以分离出能消除石油污染的微生物;用含无机碳源的培养基分离自养型微生物。 ②改变微生物的培养条件。例如,将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物;用普通培养基在无氧条件下分离厌氧型和兼性厌氧型微生物。 2.用稀释涂布平板法对微生物进行计数时的注意事项。 (1)为了保证结果准确,一般设置至少3个平板,选择菌落数在30~300的平板进行计数,并取其平均值。 (2)统计的菌落数往往比活菌的实际数目少,原因是当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 3.比较平板划线法和稀释涂布平板法的异同点。 平板划线法 稀释涂布平板法 相同点 都能将微生物分散到固体培养基表面,以获得单细胞菌落;接种工具都需要灭菌 不同点 接种工具 接种环 涂布器 优缺点 操作简便, 不能计数 需要先进行梯度稀释,操作相对繁琐,可用于计数 4.统计菌落数目的方法。