内容正文:
第1章 第2节 微生物的培养技术及应用
第2课时:微生物的选择培养和计数
学习目标
目标
01
02
03
通过对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数,理解并掌握微生物计数的方法。(科学探究)
通过实例,理解各类微生物都能适应其生活环境。(生命观念)
根据微生物的代谢类型,配制选择培养基,总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。(科学思维)
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课题背景
自然界中微生物数量繁多,种类庞杂,要想从中分离出需要的特定微生 物并不容易,尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时,仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。
稀释涂布平板法呈现的杂菌群
那么我们又如何达成这一目标呢?
科学家们应用选择性培养基解决了这一难题。
一、选择培养基
寻找耐高温的DNA聚合酶
(一)科学实例:
聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外扩增DNA片段的技术,此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。
1973年,布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌,并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。
筛选原因:水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
那么,如何从众多的微生物中筛选出单一菌种?
美国黄石公园
一、培养基的配制
寻找耐高温的DNA聚合酶
(一)科学实例:
筛选水生栖热菌的条件是什么?为什么该条件能让其“ 脱颖而出”?
你还知道哪些条件能影响微生物的生存?
因为热泉温度为70~80℃,淘汰了绝大多数微生物,只有水生栖热菌被筛选出来。
pH和氧气浓度等;
在实验室中选择培养特定的微生物有什么启示?
寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
耐寒微生物
耐热微生物
石油分解菌
(二)实验室中微生物筛选的原理:
人为提供 的条件(包括 、 和 等),同时 。
有利于目的菌生长
抑制或阻止其他微生物的生长
营养
温度
pH
(三)概念:
在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。
(四)类型:
在培养基中加入某种化学物质
改变培养基中的营养成分
改变微生物的培养条件
一、培养基的配制
培养基中加氨苄青霉素
具有氨苄青霉素抗性的菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌
培养基应有菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰
怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?
举例
一、培养基的配制
怎么证明一个选择培养基具有选择性呢?
应该设置基础培养基(如牛肉膏蛋白胨培养基)或完全培养基作为对照,若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基,则该选择培养基具有选择性。
基础培养基
怎么证明一个选择培养基具有选择性呢?
如果让你配制一种培养基,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来,培养基的配方该如何设计?
选择培养基
一、培养基的配制
选择培养基配方的设计
思考•讨论
一、选择培养基
尿素[CO(NH2)2]含氮量高,化学性质稳定,是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。
这些细菌之所以能分解尿素,是因为能合成脲酶,来催化尿素分解。
CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3
脲酶
尿素分子模型
选择培养基配方的设计
思考•讨论
一、选择培养基
1.你如何设计培养基配方,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来?
2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?
培养基添加尿素作唯一氮源,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖。
该培养基与普通培养基相比较,共同点是都以有机碳(如葡萄糖)作为碳源,都有水和无机盐;不同点是该培养基以尿素作为唯一氮源,使只有能以尿素作为氮源的微生物生长。
分离酵母菌、霉菌等真菌
分离固氮菌
分离自养型微生物
允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
④加高浓度食盐
金黄色葡萄球菌
⑤金黄色葡萄球菌
能消除石油污染的微生物
③不加含碳有机物的无碳培养基
②不加氮源的无氮培养基
①加入青霉素的培养基
选择培养基:
一、培养基的配制
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基一
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4
·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基二
1.从物理性质来讲,两者属于__