第3章 探究•实践 DNA片段的扩增及电泳鉴定（课件PPT）-【状元桥·优质课堂】2023-2024学年新教材高中生物选择性必修3 生物技术与工程（人教版2019）

基因工程 第3章　 探究•实践　DNA片段的扩增及电泳鉴定 课后　课时作业 目 录 Contents DNA的热变性 温度 解聚与结合 可解离 正电荷 负电荷 返回目录 生物学　选择性必修3 　 电场 相反 浓度 大小 构象 紫外 返回目录 生物学　选择性必修3 　 微量移液器 微量离心管 10 底部 PCR仪 返回目录 生物学　选择性必修3 　 大小 电泳缓冲液 0.8%～1.2% 核酸 凝胶载样缓冲液 微量移液器 返回目录 生物学　选择性必修3 　 1～5 凝胶边缘 返回目录 生物学　选择性必修3 　 高压灭菌 －20 ℃ 缓慢 返回目录 生物学　选择性必修3 　 低 污染 过高 过低 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 返回目录 生物学　选择性必修3 　 一、实验原理 1．DNA片段的扩增 PCR利用了_____________________原理，通过调节______来控制DNA双链的_______________。 2．琼脂糖凝胶电泳 (1)带电粒子：DNA分子具有_________的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上_________或_________。 (2)迁移动力与方向：在______的作用下，带电分子会向着与它所带电荷______的电极移动，这个过程就是电泳。 (3)迁移速率：在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的______、DNA分子的______和______有关。 (4)检测：凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的______灯下被检测出来。 二、方法步骤 1．移液：用_______________按照配方或PCR试剂盒的说明书，在_______________中依次加入各组分。 2．混合：待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。 3．离心：将微量离心管放在离心机上，离心约______s，使反应液集中在管的______。 4．反应：将装有反应液的微量离心管放入____________中，设置好循环程序进行反应。 5．根据待分离的DNA片段的______，用_____________配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积为____________________的琼脂糖溶液，并加入适量的______染料混匀。 6．将扩增得到的PCR产物与_____________________(内含指示剂)混合，再用_______________将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。 7．接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为_________V/cm。待指示剂前沿迁移接近____________时，停止电泳。 8．电泳结束后，取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。 三、操作提示 1．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行____________处理。 2．缓冲液和酶应分装成小份，并在__________储存。使用前将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上______融化。 3．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。 4．在进行操作时，一定要戴好一次性手套。 四、关键点拨 1．未出现扩增条带的主要原因 (1)Taq DNA聚合酶失活。 (2)引物出现质量问题。 (3)Mg2＋浓度过低。 (4)变性时的温度_____，变性时间短。 2．出现非特异性扩增条带的主要原因 (1)模板DNA出现______。 (2)引物特异性不强或形成引物二聚体。 (3)Mg2＋浓度______。 (4)复性时的温度______等。 【例1】 下列有关电泳的叙述，不正确的是(　　) A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率 C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相同的电极移动 D．PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定 答案　C 解析　由于同性相斥、异性相吸，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动，C项错误。 【例2】 PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题： (1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是________(填序号)。 (2)操作③中使用的酶是______________。PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、__________三步，其中复性的结果是_____________________