1.2.2 微生物的选择培养与计数（分层训练）-2023-2024学年高二生物下学期同步过关训练（人教版2019选择性必修3）

第1章 发酵工程 第2节 微生物的培养技术及应用 二 微生物的选择培养和计数 一、选择培养基 1.原理：人为提供有利于 生长的条件(包括 等)，同时 其他微生物的生长。 2.实例：水生栖热菌能在 ℃的高温条件下生存，而 在此条件下不能生存。据此，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌,进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于 的 (PCR)。 3.定义：在微生物学中，将允许 的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 二、微生物的选择培养（以培养土壤中分解尿素的细菌为例） 1.方法：对样品进行充分 ，然后将 涂布到制备好的 培养基上，也就是要釆用 法，待 后，将平板 、培养。在涂布有 的平板上就可以观察到分离的单菌落。 2.操作过程 （1）系列稀释操作：如下图所示，在编号为1×102～1×107试管中分别盛有9mL ；将10g土样加入盛有 的锥形瓶中， ；取1mL上清液加入盛有 的试管中，依次 。 （2）涂布平板操作：第1步：取菌液——取0.1mL菌液，滴加到 表面；第2步：涂布器消毒——将涂布器浸在盛有 的烧杯中；第3步：涂布器灭菌——将涂布器放在火焰上灼烧，待 后，再进行涂布；第4步：涂布平板：用涂布器将 均匀地涂布在培养基表面。涂布时可 ，使涂布均匀。 （3）培养：待 后，将平板 ，放入 中培养1～2 d。 三、微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 （1）原理：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的 ，就能推测出样品中大约含有多少 。 （2）计数原则：一般选择菌落数为 的平板进行计数。样品的 将直接影响平板上的菌落数目，通常选用 的样品液进行培养。在同一稀释度下，应至少对 个平板进行重复计数，然后求出 。 （3）注意事项：用稀释涂布平板法统计活菌数目时，统计的 往往比 的实际数目少，这是因为当 时，平板上观察到的只是 菌落。因此，统计结果一般用 而不是用活菌数来表示。 2.显微镜直接计数法：该方法利用特定的 计数板，在 下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是 的总和。 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.基础知识：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成 酶的微生物才能分解尿素。利用以 作为唯一氮源的 培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 2.实验设计 (1)土壤取样：取酸碱度接近 且 环境中的距地表约 cm的土壤层。 (2)样品的稀释：测定土壤中细菌的数量，一般选用 倍稀释的稀释液进行平板培养，当第一次做这个实验时可以将稀释的范围放 （宽、窄）一点，以保证能从中选择出菌落数在 的平板进行计数。 (3)微生物的培养与观察 ①培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养 和培养时间。细菌一般在 ℃的温度下培养 d。 ②观察记录：记录菌落数目时，每隔 h统计一次菌落数目，选取 时的记录作为结果；一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出 的菌落特征，最好以表格的形式将不同菌落的特征记录下来，这些特征包括菌落的 等。 3．操作提示 (1)安全操作：将涂布器从酒精中取出时，要 ，然后再放在火焰上灼烧。不要将 的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 (2)无菌操作：取土样的用具在使用前都需要 ；实验操作均应在 进行；