2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体 课件 2022—2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

动物细胞融合技术与单克隆抗体 细胞工程 1 回顾植物体细胞杂交技术 运用植物体细胞杂交技术，可以跨越不同种植之间生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型。 2 01 动物细胞融合技术 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞就有原来两个细胞的遗传遗传信息。 细胞质膜有一定的流动性 1.概念 2.原理 3 01 动物细胞融合技术 方法 物理方法：电融合法、离心法 化学方法：聚乙二醇（PEG）法 与植物原生质体融合的基本原理相同 生物方法：灭活病毒诱导法 动物细胞融合特有的诱导方法 病毒不灭活可以吗？为什么？ 原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 4 01 动物细胞融合技术 过程 动物细胞融合技术 动物细胞培养 细胞质膜有一定的流动性 原理 细胞增殖 细胞融合完成的标志：细胞核融合 杂交细胞 5 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞融合前的处理方法 诱导细胞融合的方法 细胞融合成功的标志 主要用途 意义 细胞膜具有一定的流动性 植物细胞的全能性 用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞 电融合法、离心法； PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法 电融合法、离心法 PEG融合法 灭活病毒诱导法 再生出细胞壁 细胞核的融合 获得完整的杂种植株 主要用于制造单克隆抗体 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 细胞膜具有一定的流动性 01 动物细胞融合技术 02 单克隆抗体制备 抗体由什么细胞产生？ 抗体的化学本质是什么？ 抗体与抗原作用的特点？ 抗体主要分布在哪里？ 7 02 传统抗体的生产方法 产量低、纯度低、特异性差 缺陷？ 大量单一抗体 克隆单一的浆细胞 动物会接触多种天然抗原，体内相应产生的特异性抗体种类可以达到百万种以上，但每一个浆细胞只分泌一种特异性抗体。 单克隆抗体制备 反复注射到小鼠体内 获得多种浆细胞 某种抗原 分离出多种抗体 改进？ 8 02 一个浆细胞 浆细胞群 抗体 克隆 产生 × 浆细胞不具有无限增殖的能力 单 克隆 抗体 克隆：从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体，在动物细胞水平指动物细胞培养。 如何解决？ 单克隆抗体制备 9 02 设计方案 浆细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 单克隆抗体 英国米尔斯坦 德国科勒 动物细胞融合 既能迅速大量增殖，又能产生抗体 单克隆抗体制备 动物细胞培养 10 用抗原注射小鼠 从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞培养 浆细胞 骨髓瘤细胞 小鼠的脾脏中获取 杂交瘤细胞 融合 筛选1 诱导融合后，培养液中存在哪几种细胞？ 未融合的B淋巴细胞 未融合的骨髓瘤细胞 B—B 杂交细胞 瘤—瘤 杂交细胞 B—瘤 杂交瘤细胞 足够数量的产特定抗体的杂交瘤细胞 筛选2 继续培养 单克隆抗体 体外培养 注射到小鼠腹腔中 02 单克隆抗体制备 02 筛选1： 置于HAT 培养基上培养 1.该培养基从功能分类上属于什么培养基？ 2.能在其中存活并增殖的细胞是？ DNA复制中所需的核苷酸有两个合成途径：全合成途径和补救合成途径。正常细胞内两种途径都具备。 氨基喋呤(A)可以抑制全合成途径； 补救合成途径需两种酶：胸腺嘧啶核苷激酶(TK)和次黄嘌呤磷酸核苷转移酶(HPRT)，其次还需要次黄嘌呤(H)及胸腺嘧啶核苷(T)作为原料。正常细胞有这两种酶，而用于细胞融合的骨髓瘤细胞有遗传缺陷，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷(TK－)或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT－)缺陷。 获得杂交瘤细胞 单克隆抗体制备 选择 12 02 克隆化培养与抗体检测（筛选2）： 筛选出分泌所需抗体的杂交瘤细胞 将杂交瘤细胞进行稀释，每个培养孔只有一个杂交瘤细胞，这样每个孔培养得到的抗体就是单抗。 培养一段时间 取上清进行抗体检测 继续培养 足够数量的产特定抗体的杂交瘤细胞 体外培养 （从细胞培养液中获取） 注射到小鼠腹腔内 （从小鼠腹水中获取） 单克隆抗体制备 多次筛选 细胞培养板 检测用的抗原？ 抗体检测检测原理 抗原和抗体能够特异性结合 ③阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。 部分杂交瘤细胞在培养过程种可能失去增殖或分泌抗体的能力，因此需要多轮抗体检测和克隆化培养，以获得足够数量的稳定的既能增殖又能分泌抗体的杂