1.2 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得课件2023-2024学年高二下学期生物浙科版选择性必修3

纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 第2节 浙科版 选择性必修3 1 1.能概述平板划线法和稀释涂布平板法的原理、操作和用途，能够熟练掌握接种、培养并分离酵母菌的实验方法 2.能理解显微镜计数法的原理和操作 3.能说明利用选择培养基筛选微生物的原理，并掌握能分解尿素的微生物的分离与计数实验原理和操作 学习目标 目标微生物的分离和纯化 在固体培养基上采用划线或稀释涂布的方法接种，可获得单菌落 由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团，这样的细胞集团称为单菌落。 1.平板划线法 (1)原理： 单个细胞 微生物群 单个菌落 连续划线 分散 生长繁殖 （2）方式： A.连续平行划线 ------ 每划一条线都要将接种环在酒精灯的火焰上灭菌 B.扇形划线 C.多次连续平行划线 ------ 划线可分3~4次进行，不需再次蘸取菌种，只需在上次划线的末端区域直接开始划线即可。 ----从一点出发，向左右连续划平行线 “平板划线”实验操作 1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。 2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞 3、将试管口通过火焰 4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 5、将试管通过火焰，并塞上棉塞 6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基 7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连 8、将平板倒置放入培养箱中培养。 划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照） 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. ②划线首尾不能相接 ③每次划线前接种环进行灭菌 ④划线后,培养皿倒置培养 平板划线法注意事项: 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 （1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 问题讨论 杀死接种环上原有微生物 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞 2024/2/1 2.稀释涂布平板法 先将菌液进行梯度稀释 不同稀释度的菌液各取0.1ml，加在固体培养基表面 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养 稀释度适当的培养基表面能得到单菌落 根据菌落的形状、大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养 ①铲取土样，将样品装入纸袋中 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 1mL 1ⅹ10 90mL无菌水 1ⅹ107 1ⅹ105 1ⅹ106 1ⅹ103 1ⅹ102 1ⅹ104 1mL 1mL 1mL 1mL 9mL无菌水 1mL ③取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 稀释涂布平板法的操作过程 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌 ④取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ⑤将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑥将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑦用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养 微生物数量的测定 如何准确测定微生物的数量？ 一是在保证能准确计数的前提下减小稀释度； 二是将相同稀释度下多组数值取平均值后再计算 方法：稀释涂布平板法和显微镜计数法 1.稀释涂布平板法 选择30-300个菌落的平板进行计数； 每个稀释度至少取3个平板取其平均值； 统计的菌落往往比活菌的实际数目低； 统计的结果一般用菌落数而不是活菌数； 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。 （1）计数原则 （2）计算： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M M代表稀释倍数； C代表某一稀释度下3个平板上生长的平均菌落数； V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) 例：甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ （80+90+100）/3 0.1 × 105 =9 ×107个 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释 倍数为106的培养基中，得到以