1.2.2 微生物的选择培养和计数课件-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

第二课时 微生物的选择培养和计数 第1章　发酵工程 人教版高中生物 选择性必修3 第1章　第2节　微生物的培养技术及应用 学习目标 1.能运用生物与环境相适应的观点，解释选择培养基筛选微生物的原理。 2.能按照科学探究的要求，应用稀释涂布平板法和微生物数量测定的方法，设计从土壤中分离分解尿素的细菌并进行计数的方案。依据设计的方案，运用无菌操作技术和微生物分离、培养的方法初步分离出目标菌。 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢？ 事实1 稀释涂布平板法中出现的杂菌 新课导入 科学实例 寻找耐高温的DNA聚合酶 在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶。 美国黄石公园 相应的生存环境中寻找 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 选择培养基 实验室微生物筛选原理:人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。 纤维素分解菌 启示 选择培养基、微生物的选择培养和数量测定 一 探究•实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 二 目录 高温环境下培养 无氧环境下培养 1.选择培养基： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 2.方法： （1）在培养基中加入某种化学物质。 （2）改变培养基中的营养成分。 （3）改变微生物的培养条件。 耐高温微生物 厌氧型微生物 兼性厌氧型 （一）选择培养基 分离得到酵母菌、霉菌等 加高浓度食盐的培养基 分离得到金黄色葡萄球菌 加入青霉素的培养基 分离固氮菌 分离自养型微生物 不加含碳有机物的无碳培养基 不加氮源的无氮培养基 尿素施入土壤后，会被某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。通常1g土壤中有几亿到几百亿个土壤微生物，其中细菌的数量最多，能分解尿素的细菌只是其中的一部分。 事实2 结合材料思考 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 3.怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若对照培养基中生长的菌落数多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 1.选择培养基的作用： 2.微生物选择培养获取纯培养物的方法： 分离并计数某种微生物的数量（例如，能分解尿素的细菌）。 由于土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物，必须要对土样进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的培养基上，也就是要采用稀释涂布平板法。 选择培养基 + 稀释涂布平板 单菌落 （二）微生物的选择培养 梯度稀释 涂布平板 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g 在火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 3.稀释涂布平板法的操作过程： （二）微生物的选择培养 （1）梯度稀释 微量 移液器 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养。 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 3.稀释涂布平板法的操作过程： （二）微生物的选择培养 （2）涂布平板 梯度稀释 涂布平板 放入30~37℃恒温箱中 培养1～2d 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 恒温培养箱 思考： 设置空白对照组的目的是什么？ 检测培养基灭菌是否彻底，保证实验结果的准确性。 根据实验结果，能否计算出细菌数目的是多少？原理是什么？ 可以。 4.培养与观察 （二）微生物的选择培养 ①分离微生物 ②统计样品中活菌的数目 （三）微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 ② 计数原则： ① 原理： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个______。通过统计平板