内容正文:
微生物的培养技术及应用 微生物的基本培养技术 本节聚焦: 1.什么是培养基?如何配置? 2.什么是无菌技术? 无细胞结构 原核细胞 真核细胞 微生物 真菌:酵母菌、毛霉等; 原生生物:草履虫、变形虫等 微生物:难以用肉眼观察的微小生物的统称。 病毒:SARS、新冠病毒、HIV、等RAN病毒;噬菌体等DNA病毒 细菌:蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等;放线菌:链霉菌等 研究和应用微生物的前提? 实验室培养微生物条件? 一、培养基的配制 阅读教材9页-10页相关内容,回答以下问题: 1.培养基的概念?培养基的种类?培养基的作用? 2.培养基的成分?各成分的作用? 3.培养基能直接培养病毒吗? 1.概念 2.类型及用途 液体培养基: 表面生长 (需氧型) 均匀混浊生长(兼性厌养型) 沉淀生长 (厌养型) 半固体培养基: (是否运动) 无动力 有动力(弥散) 固体培养基:菌落 几种菌落及其形态 5 划分标准 培养基种类 特点 用途 物理性质 化学成分 天然培养基 合成培养基 用途 鉴别培养基 培养基的种类 不加凝固剂 加凝固剂,如琼脂 工业生产,扩大培养 观察微生物的运动 微生物分离、鉴定、活菌计数、保存菌种 含化学成分不明确天然物质 工业生产 培养基成分明确 分类、鉴定 在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长 富集、分离出特定微生物 在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物 鉴别不同种类微生物 选择培养基 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 6 3.培养基的成分 (1)基本成分: 碳源、氮源、水、无机盐 ①碳源: 无机碳源: CO2、NaHCO3 有机碳源: 葡萄糖、蛋白质、牛肉膏等 ②氮源: 无机氮源: NH3、N2、铵盐等 有机氮源: 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 作用:①构成生物体细胞的物质和一些代谢产物 ②有些是异养生物的能源物质 作用:合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等物质所必需的 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000mL 水 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 (2)在主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长的条件有哪些?例子? 二、无菌技术 阅读教材10页-11页相关内容,回答以下问题: 1.获得纯净的微生物培养物的关键是什么? 2.消毒和灭菌的概念?它们的区别? 3.常用的消毒和灭菌方法有哪些? 4.各种方法适用的对象? 1.获得纯净的微生物培养物的关键是_。 防止杂菌污染 2.无菌技术主要包括 。 消毒和灭菌 ①消毒:是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 ②灭菌:是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。 3.具体操作: ①实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒 ②培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 ③实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 ④为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。 3.消毒和灭菌的概念 ①消毒:是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 ②灭菌:是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。 ①煮沸消毒法:100 煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法:62-65 下煮30min 或 80-90 下煮30s-1min。 ③化学药剂消毒法:用70%酒精擦拭双手;氯气消毒水源。 ④紫外线消毒法: 用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台。 4.常用的消毒方法 实例:牛奶 优点? ①湿热灭菌: 利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。高压蒸汽灭菌效果最好,100 kPa、121 下维持15-30 min,常用于培养基、无菌水等的灭菌。 ②干热灭菌: 160-170 下加热2-3h。常用于玻璃器皿(吸管、培养皿等)和金属器具(耐高温的和需要保持干燥的物品)。 ③灼烧灭菌: 常用于接种工具,如涂布器、接种环、接种针或其它金属用具,试管口、瓶口等的灭菌。直接在酒精灯火焰的充分燃烧层(外焰)灼烧。 5.常用的灭菌方法 思考:无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用? 避免操作者被微生物感染 三、微生物的纯培养 阅读教材11页-13页相关内容,回答以下问题: 1.培养物、纯培养物、纯培养的概念? 2.菌落、单菌落的概念?获得单菌落的方法? 3.酵母菌纯培养的方法步骤? 4.倒平板的步骤和注意事项? 5.平板划线法的步骤和注意事项? 1.培养物、纯培养物、纯培养的概念 2.菌落、单菌落的概念 3.获得单菌落的方法 平板划线法