1.2 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（第1课时）（教学课件）生物浙科版选择性必修3

第一节　体液调节是通过化学信号实现的调节 第一章 发酵工程 第二节　神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第二节　神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第二节 纯净的目标微生物可通过 分离和纯化获得（第1课时） 目 录 平板划线或稀释涂布的接种方法 接种、培养并分离酵母菌 稀释涂布平板法和显微镜计数法对微生物计数 一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化 1.单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。 在固体培养基表面形成单菌落，可以用于菌种的分离、鉴定和纯化。 2．单菌落获取方法： 意义： 单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一. 单菌落分离或接种的方法：通过平板划线法和稀释涂布平板法等方法获得单菌落 （1）平板划线法： 原理 ：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落。 方法：通常用接种环蘸取液体 培养物或挑取固体表面的微生物 后，在固体培养基表面进行连续 平行划线、扇形划线或其他形式 的划线，以实现接种的目的。 单击此处编辑母版文本样式 多次连续平行划线 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 平板划线法 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 多次连续平行划线法 思考：若完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？ 平板划线操作中三种灼烧的目的不同 1.蘸取菌液前灼烧 2.每次划线前灼烧 3.划线操作结束后灼烧 避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。 杀死残留菌种，保证每次划线接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 用接种环蘸菌液____次，在固体培养基表面划线，下一次划线应从上一次划线的______开始。每次划线前接种环要 ，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的 。若共划线五次，接种环要烧灼____次。另外：每次划线都不能与之前的线条_____；不能将最后一次划线与第一次划线相连；不能_____培养基。培养基需 后，放入培养箱培养。 划破 重叠 6 末端 1 灭菌 单菌落 倒置 注意：1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。 2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。 思考 （1）灼烧接种之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种。 (2）划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (3)划线用力要大小适当，防止用力过大划破培养基 (4)每次实验：划3个平板（重复实验）1个不接种（空白对照） 划线注意事项 单击此处编辑母版文本样式 例题1.微生物接种的方法很多,平板划线法是常用的一种。下图是平板划线示意图,划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是(　　) A.划线操作时,将蘸有菌种的接种环插入培养基 B.平板划线后,培养微生物时要倒置培养 C.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连 D.在第②~④区域中划线前都要对接种环进行灭菌 A 划线时不能将接种环插入培养基,而是在培养基表面划线 例2：在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种 （甲）、培养结果（乙）如图所示。 有关叙述错误的是 （ ） Ａ．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 Ｂ．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 Ｃ．接种过程中至少需要对接种环灼烧 ５ 次 Ｄ．甲中 ａ 区域为划线的起始位置 D 例3： 若实验室为分离纯化优良菌种进 行如下操作，排序最合理的是 （ ） Ａ．②①④③ Ｂ．②①④①③② Ｃ．②①④②③② Ｄ．①④①③② B （2）稀释涂布平板法 a.原理 ：用无菌水将菌液进行一系列的梯度稀释，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的单菌落。 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 平板划线法的原理？ 单击此处编辑母版文本样式 b.过程： 稀释菌液 （10-5 ~ 10-7倍） 涂布 培养 用移液管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液，依次方法得到10-5 ~ 10-7倍稀释液。 在培养皿侧面或底面做好标记后,用移液管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养