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液体培养基 1.2微生物的培养技术及应用 高压蒸汽灭菌 从社会中来 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌,再经过发酵就可以制成酸奶,由于制作工艺并不复杂,一些人会在家里自制酸奶,自制酸奶虽然方便,但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜,主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么,怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢? 应该先对制作用具和原料进行灭菌处理,再接种纯的菌种,并控制发酵条件,避免杂菌进入。 酸奶 这需要应用无菌技术和微生物的培养技术 一、微生物概述 1.微生物的概念: _的统称。 包括_等 2._,_是研究和应用微生物的前提,也是发酵工程的重要基础。 防止杂菌污染 获得纯净的微生物培养物 3.实验室培养微生物的条件: ①要为人们需要的微生物提供合适的_条件; ②要确保_,并将需要的微生物分离出来。 营养和环境 其他微生物无法混入 难以用肉眼观察的微小生物 细菌、真菌、病毒及一些原生生物 草履虫 衣藻 酵母菌 青霉菌 大型真菌 球菌 蓝细菌 二、培养基的配制 人们按照_,配制出供其生长繁殖的营养基质,即培养基。 1.培养基的概念、作用及类型 (1)概念: 微生物对营养物质的不同需求 (2)作用: 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 (3)类型: 液体培养基 固体培养基 菌落 不含凝固剂(如琼脂) 在液体培养基中加入琼脂后制成的琼脂固体培养基,是实验室中最常用的培养基之一 呈液态状态 微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长形成肉眼可见的菌落 补充资料:培养基的类型及用途 划分标准 培养基种类 特点 用途 物理性质 化学成分 用途 不加凝固剂 加凝固剂,如琼脂 工业生产 观察微生物的运动、 分类鉴定 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 培养基成分明确 分类、鉴定 允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 培养、分离出特定微生物 在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物 鉴别不同种类微生物 天然培养基 合成培养基 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 选择培养基 鉴别培养基 2、培养基的营养构成: (1)基本成分: 水、碳源、氮源、无机盐等。 碳源 无机碳源: 有机碳源: 氮源 NH4+、NO3-、NH3等。 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。 CO2、CO32-、HCO3-。 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。 无机氮源: 有机氮源: 来源于动物,含有糖、维生素和有机氮等营养物质 无机盐 Zn、Cu、Mn、Co、Mo等 大量元素: 微量元素: Ca、K 、Mg等 牛肉膏、蛋白胨: 自养微生物 异养微生物 为什么培养基需要氮源? 是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 (2)特殊需求: 满足微生物对 _的需求 ④培养厌氧微生物时,需要提供_的条件。 ①培养乳酸杆菌时,需要在培养基中添加_; ②培养霉菌时,需要将培养基调至_; ③培养细菌时,需要将培养基调至_; 维生素 酸性 中性或弱碱性 无氧 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 氮源和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000ml 水 例:某种细菌培养基的营养构成 pH、特殊营养物质、氧气 三、无菌技术 1.概念: _的培养微生物的操作技术 2.手段: 主要包括_和_。 (1)对实验操作的_、操作者的_,进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的_、_和_等进行灭菌。 无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用? 还能有效避免操作者被微生物感染。 防止杂菌污染 消毒 灭菌 空间 衣着和手 器皿 接种用具 培养基 3.消毒 (1)概念: 指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。 (2)常用的消毒方法 ①煮沸消毒法: 100 煮沸5~6min,可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。 ②巴氏消毒法: 62~65 下消毒30 min或80~90 处理30s~1min 适合一些不耐高温的液体,如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物,并且不破坏牛奶的营养成分。 用70%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。 ③化学药剂消毒法: ④紫外线消毒法: 接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min。可杀死物体表面和空气中的微生物。在照射前,适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果。 4.灭菌 (1)概念: 指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。 (2)常用的灭菌方法 ①湿热灭菌: 利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法。 高压蒸汽灭菌效果最好,100 kPa、121 下维持1