内容正文:
第2节 微生物的培养技术及应用
01
微生物的基本培养技术
WEISHENGWUDEJIBENPEIYANGJISHU
1
传统发酵技术的缺点
菌种差异、杂菌情况不明、发酵过程的控制缺乏标准等,往往会造成发酵食品的品质不一。
为了缩短发酵时间,确保品质稳定,工业上大规模生产时,通常先通过微生物培养技术获得单一菌种,再将它们接种到物料中进行发酵。
防止杂菌污染,获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提,也是发酵工程的重要基础。
在实验室培养微生物,一方面要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件;另一方面要确保其他微生物无法混入,并将需要的微生物分离出来。
(一)微生物
难以用肉眼观察的微小生物的统称。
1.概念
2.微生物的类群
(1)无细胞结构
(2)原核细胞
(3)真核细胞
病毒:SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒;噬菌体等DNA病毒
细菌:蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等;
放线菌:链霉菌等
真菌:酵母菌、毛霉等;
原生生物:草履虫、变形虫等
3.微生物的结构
(一)微生物
直径在30~200nm之间
直径在0.5~5μm之间
直径3~6μm之间
~
~
~
微生物结构简单、形体微小,眼睛看不到,若想看某种纯净的微生物。我们该怎么做?若想通过肉眼能看到细菌,我们又该如何?
必须对其进行分离纯化;
对微生物进行大量培养,致使其在培养基表面或内部形成菌落。不同的细菌具有不同的菌落。
分散的微生物在适宜的琼脂固体培养基表面或内部生长,可以形成肉眼可见的菌落。
沙门氏菌
毛霉
菌落是鉴定菌种的重要依据
(一)微生物
2.实验室培养微生物条件
(1)提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件。
——培养基
(2)确保其它微生物无法混入。
——无菌技术
(二)培养基的配制
2.作用:用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
1. 培养基的概念
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
固体
培养基
液体
培养基
有无琼脂
长有酵母菌菌落
盛有液体培养基
分离、计数、鉴定、保藏等
扩大培养、用于工业生产
特别提醒
(1)固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂,不能为微生物生长提供能量和碳源。
(2)病毒为非细胞结构生物,只能在活细胞中营寄生生活,目前不能利用人工培养基来培养。
(二)培养基的配制
3.基本成分
水、碳源、氮源和无机盐
① 碳源
无机碳源:
CO2、CO32-、HCO3-等
有机碳源:
糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等
自养微生物
异养微生物
② 氮源
无机氮源:
NH4+、NO3-、NH3等
有机氮源:
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
注:含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
③ 无机盐
Ca、K 、Mg等为大量元素
Zn、Cu、Mn、Co、Mo等为微量元素
*一般情况下,不添加氮源培养基可用来培养_____微生物
固氮
补充说明:
① 含有C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的碳源、氮源、能源。
② 自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于碳源。
③ 自养型微生物所需的碳源来自无机碳源,异养型微生物所需的碳源来自有机碳源,因此可以根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。
④ 无机氮源不但能给自养型微生物提供氮源,也能作为能源物质,如NH3既作为硝化细菌的氮源,也作为能源(NH3氧化释放的化学能)。
⑤ 无机盐除了可以调节酸碱平衡、维持一定的渗透压之外,有些无机盐离子可以作为化能合成菌的能源(如铁细菌)。
旁栏思考题:
为什么培养基需要氮源?
培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
(二)培养基的配制
4.培养基的营养构成
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5 g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10 g 氮源和维生素等
NaCl 5 g 无机盐
H2O 定容至
1 000ml 水
牛肉膏和蛋白胨来源与动物,含有糖、维生素和有机氮等营养物质。
牛肉膏蛋白胨培养基
是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基
(二)培养基的配制
5.培养基的特殊需求
在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对___、____________以及___的需求;
pH
特殊营养物质
O2
微生物例子 培养基需要的特殊物质或条件
乳酸杆菌
霉菌
细菌
厌氧微生物
添加维生素
调至酸性
调至中性或弱碱性
提供无氧的条件
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等
划分 培养基种类 特点 用途
物理