内容正文:
第二章 细胞工程
第一节 植物细胞工程
一、细胞工程
1、概念:应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。
2、分类:植物细胞工程
动物细胞工程
二、植物细胞工程的基本技术
(一)植物组织培养技术
1、概念:将离体的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成完整植株的技术
2、原理:细胞全能性
(1)概念:细胞经分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能,即细胞具有全能性
(2)原因:生物体几乎每个细胞都具有该物种发育成个体所需的全部基因
(3)全能性大小比较
受精卵>生殖细胞>干细胞>体细胞;
植物细胞>动物细胞
随着细胞分化程度的提高,细胞的全能性逐渐变小
3、过程
脱分化 再分化
离体的植物器官、组织或细胞 ―---→愈伤组织 ―---→胚状体
―---→幼苗―---→植株
注:脱分化过程不需要光,再分化过程需要光
愈伤组织:排列疏松而无规则,高度液泡化的无定型状态的薄壁组织
4、 关键激素
(1)生长素与细胞分裂素的比值 高,利于根的分化,抑制芽的分化
低,利于芽的分化,抑制根的分化
适中,促进愈伤组织的形成
(2)先用生长素,再用细胞分裂素,有利于细胞分裂,细胞不分化
先用细胞分裂素,再用生长素,细胞既分裂也分化
同时使用,分化频率提高
5、实例:菊花的组织培养
(1)制备MS固体培养基
①配制各种母液:无机盐母液、激素母液、维生素母液
②配制培养基:琼脂+水―→熔化―→加蔗糖―→加各种母液―→加蒸馏水
定容―→调PH―→分装
③灭菌:高压蒸汽灭菌
(2)外植体和超净工作台消毒:
酒精30s―→无菌水2~3次―→次氯酸钠溶液30min―→无菌水2~3次
(3)接种:酒精灯火焰旁接种
(4)培养:18-22℃培养箱中培养
15-20天后,将愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上,长芽后,再
将其转接到诱导生根的培养基上。
(5)移栽
(6)栽培
6、植物组织培养的优点:保持原品种的遗传特性
(二)植物体细胞杂交技术
1、概念:将不同来源的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成植物体的技术
2、原理:细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
3、过程:
①去壁:纤维素酶和果胶酶
②诱导融合的方法:物理法:电融合法、离心法
化学法:聚乙二醇(PEG)融合法、
高Ga2+-高PH融合法
③细胞融合完成的标志:新的细胞壁的生成
4、植物体细胞杂交成功的标志:杂种植株的形成
5、优势 (1)克服了植物远缘杂交不亲和的障碍
(2)打破了物种间的生殖隔离
(3)扩大了遗传重组的范围
三、植物细胞工程的应用
(一)植物繁殖新途径
1、快速繁殖(微型繁殖): 可以高效快速地实现种苗的大量繁殖
2、作物脱毒:
(1)原理:采用植物分生组织培养来除去病毒(因为分生区附近的病毒极少或没有)
(2)选材:茎尖或根尖
(二)作物新品种的培育
1、单倍体育种:
(1)过程:
花药离体培养 秋水仙素处理
植物―-------→单倍体植株―-------→二倍体纯和植株
(2)原理:染色体变异
(3)优点:明显缩短育种年限
2、突变体的利用:在组织培养中会出现突变体,通过从有用的突变体中选育出新品种(如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体)
(三)细胞产物的工厂化生产
1、次生代谢物:植物代谢会产生一些一般认为不是植物体基本的生命活动所必
须产物
(1)本质:一类小分子有机化合物
(2)作用:抗病、抗虫、
(3)特点:含量低
2、愈伤组织阶段获取所需细胞产物
第二节 动物细胞工程
· 常用技术:动物细胞培养(动物细胞工程的基础)
动物细胞融合
动物细胞核移植
一、动物细胞培养
1、概念:从动物机