2023届高三生物二轮复习课件基因工程

基因工程 复习 一、DNA重组技术的基本工具 二、基因工程的基本操作程序 1 主要是从原核生物中分离纯化出来的。 ⑴来源： ⑵作用： ⑶结果： 形成两种末端 1. “分子手术刀” ——限制酶 黏性末端 平末端 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列(回文序列)，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(用于:切取目的基因和切割运载体) 一、DNA重组技术的基本工具 2 G A A T T C G C T T A A A A T T C G 限制酶切割ＤＮＡ分子示意图 C T T A A G 思考： 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 2个切口， 4个黏性末端 黏性末端 黏性末端 中轴线 3 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。 4 练习1.下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 B 5 练习2.已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有一个酶切位点被该酶切断，则理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是（ ） A．3 B．4 C．9 D．12 C 6 2. “分子缝合针” —ＤＮＡ连接酶 ⑴作用：连接磷酸二酯键,而不是氢键。 ⑵ DNA连接酶的种类 7 3. “分子运输车” —载体 (2)载体的必要条件（为什么要这些条件？） 有一个至多个限制酶切割位点； 能够在受体细胞中自我复制或整合到染色体 DNA上随染色体DNA进行同步复制; 具有标记基因。 (1)常用的载体：质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒。 ⑶真正用作载体的质粒，都要人工改造 8 四个基本步骤： 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 二、基因工程的基本操作程序 9 1.目的基因的获取 目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 获取目的基因的常用方法有哪些? ⑴从基因文库中获取 ⑵利用PCR技术扩增 ⑶人工合成 10 (1)、从基因文库中获取目的基因 11 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 重组载体 基因组文库 导入受体菌中储存 ①基因文库的构建方法 a.基因组文库的构建 12 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA 单链DNA 双链cDNA片段 重组载体 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 导入受体菌中储存 b. cDNA文库的构建-----逆转录法： 13 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 14 ②.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，这样的受体菌群称为基因文库。 种类 基因组文库：含有某种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了某种生物的部分基因， 如：cDNA文库 15 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ . ②原理：__________ 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 模板DNA 四种dNTP 引物 热稳定DNA聚合酶 ⑵利用PCR扩增目的基因 16 ④过程 a、变性 （90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火 （复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸 （70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 17 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 化学合成法: ⑶人工合成： 18 质粒 目的基因 限制酶处理 一个