2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

单克隆抗体 筛选二 多种融合细胞 杂交瘤细胞 体外或 体内培养 筛选一 骨髓瘤 细胞 诱导融合 分泌特异抗体 的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞群 提取 已免疫的 多种B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备 既能大量繁殖 又能产生抗体 特异性强 灵敏度高 可大量制备 注射 抗原 既能大量繁殖 又能产生特定抗体 能大量繁殖，但不能产生抗体 能产生抗体，但不能大量繁殖 1 一 补充 10-50代细胞 取动物组织 分瓶培养 制成细胞悬液 原代培养 传代培养 继续培养 分离成单个细胞，加培养液 细胞株 （遗传物质发生改变） 细胞系 请同学们快速阅读课本P48-20页回答以下问题： 1. 什么是动物细胞融合技术（概念）？原理是什么？ 2. 所形成的杂种细胞有什么特点？ 3. 诱导动物细胞融合的方法有哪些？ 4. 动物细胞融合技术的意义和应用有哪些？ 5.怎么制备单克隆抗体？ 6.单克隆抗体有什么应用？ 第2节 动物细胞工程 动物细胞融合技术与单克隆抗体 A细胞 B细胞 正在融合的原生质体 再生出细胞壁 脱分化 再分化 移栽 植物细胞融合 植物组织培养 杂种植株 愈伤组织 A原生质体 B原生质体 移栽后的植株 植物体细胞杂交技术 回顾旧知 实例： 1970年 人-鼠细胞融合融合实验 回顾--必修一：细胞膜的结构 1.概念： 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 细胞膜的流动性 化学法：PEG融合法 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 动物细胞融合特有 杂交细胞：具有原来两个或多个细胞的遗传信息 01 动物细胞融合技术 2.原理： 3.融合方法： 4.意义： 5.应用： ①研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。 ②利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。 物理法：电融合法 生物法：灭活病毒诱导法 8 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 相关信息 动物细胞融合成功的标志 19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？ 病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞融合前的处理方法 诱导细胞融合的方法 细胞融合成功的标志 主要用途 意义 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞 电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 再生出细胞壁 细胞核的融合 获得完整的杂种植株 主要用于制造单克隆抗体 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 动物细胞融合 植物体细胞杂交 02 单克隆抗体及其应用 产量低，纯度低，而且特异性差 反复 注射 动物体内 抗原 多种浆细胞 多种抗体（血清） 缺点 （2）什么细胞分泌抗体？ 浆细胞 （3）抗体主要分布在哪里？ 血清 （4）早期获得抗体的方法有哪些？ 1.传统抗体的制备 2.大量制备单一抗体的思路和需解决的问题 单 克 隆 抗 体 一个B淋巴细胞 细胞群 抗体 克隆 （1）什么是抗体？ 机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞不可能无限增殖 02 单克隆抗体及其应用 １：什么细胞具有无限增殖的能力？ ２：有什么方法能培养出既能分泌抗体且无限增殖的细胞？ 骨髓瘤细胞（癌细胞） 动物细胞融合 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 动物细胞融合 杂交瘤细胞 动物细胞培养 单克隆抗体 米尔斯坦和科勒大胆设想： 既能迅速大量增殖，又能产生抗体 单克隆抗体：由单个B淋巴细胞产生的只能识别一种抗原表位的特异性抗体。 注射到腹腔 注射抗原 培养骨髓瘤细胞 多种B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 多种杂交细胞 诱导融合 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 体外培养 用特定抗原对小鼠进行免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞 用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长 多次的克隆化培养和抗体检测，再筛选 体外大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖 从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体 杂交瘤细胞 单克隆抗体 第一次筛选：获得杂交瘤细胞