第10单元 第37讲 微生物的培养及应用（word教参）-【正禾一本通】2024高考生物高三一轮总复习高效讲义（老教材老高考）

第37讲　微生物的培养及应用► 对应学生用书P001 【备考目标解读】1.分析培养基的成分及其作用；比较平板划线法和稀释涂布平板法的异同。2.设计实验探究微生物培养的条件。3.关注有害微生物的控制和宣传健康生活。　　考点1　微生物的实验室培养 梳理必备知识 1．培养基 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)种类：液体培养基和固体培养基，二者的区别是是否添加凝固剂。 (3)营养成分 ①确定原则：根据微生物的需要。 ②主要营养物质：碳源、氮源、水和无机盐。 ③其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。 [提醒]　培养基中营养物质的成分要根据微生物的特点确定。自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。 2．无菌技术 (1)目的：获得纯净的培养物。 (2)关键：防止外来杂菌的入侵。 (3)常用方法：灭菌和消毒。 (4)无菌技术的主要方法及适用对象(连线) [提醒]　选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。 3．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)计算→ (2)称量→ (3)溶化→ (4)灭菌→ (5)倒平板→ 4．纯化大肠杆菌 (1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。 (2)主要方法及纯化原理 主要方法 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 通过连续划线操作实现的 将菌液进行一系列的梯度稀释和涂布平板操作实现的 平板培养 示意图 [提醒]　两种纯化大肠杆菌的方法都能获得单细胞菌落。但是平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。 5．菌种的保藏方法 (1)临时保藏法：对于频繁使用的菌种，先接种到试管的固体斜面培养基上培养，然后放入4℃的冰箱中保藏。 (2)甘油管藏法：对于需要长期保存的菌种，先将菌液转入灭菌后的甘油中，混匀后放在－20℃冷冻箱中保存。 【易错辨析】　//////////////////////////// 1．在配制培养基时，一般微生物除满足营养需求外，还应该考虑pH、氧气及特殊营养物质的要求。(√) 2．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。(×) 提示：倒平板时将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞，右手使瓶口通过火焰，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，用右手倒入培养基后，左手立即盖上培养皿皿盖。 3．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。(×) 提示：灼烧接种环之后，要冷却后才能挑取菌落，以免温度太高杀死菌种。 4．消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害。(√) 5．无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(×) 提示：如果无菌操作的对象不耐高温或需要保持干燥，都不能采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。 提升关键能力 1．消毒和灭菌的辨析 条件 结果 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 2.两种纯化方法的比较 平板划线法 稀释涂布平板法 接种 用具 接种环 涂布器 注意 事项 (1)接种环的灼烧： ①第一次划线前，避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；②再次划线前，杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种直接来源于上次划线的末端；③划线结束后，杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 (2)接种环灼烧后，要冷却后才能接触菌液，以免温度太高杀死菌种。 (3)划线时用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破 (1)在进行稀释操作时，每支试管及其中的9 mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm处。 (2)涂布平板时：①涂布器用体积分数为70%的酒精消毒，取出时要让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃；②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精；③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管头不要接触任何其他物体 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征 缺点 不能计数 操作较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延 共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于