2.2.2动物细胞融合技术和单克隆抗体课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节 动 物 细 胞 工 程 课时2 动物细胞融合技术与单克隆抗体 本节聚焦 动物细胞融合技术 单克隆抗体及其应用 1.概念：就是使 动物细胞结合形成 的技术。 2.结果：形成的 具有原来 的遗传信息。 3.原理： 。 4.诱导细胞融合的三种方法 (1)物理法：eg ; (2)化学法：eg ; (3)生物法：eg 。 两个或多个 一个细胞 细胞膜的流动性 电融合法 聚乙二醇（PEG)融合法 灭活病毒诱导法 杂交细胞 两个或多个细胞 （动物细胞融合特有的融合方式） 一、动物细胞融合技术 与植物原生质体融合的方法相同 思考：不灭活的病毒能否作为诱导剂？ 不灭活的病毒会感染细胞，影响细胞正常的生命活动，不能诱导细胞融合。 不能 1.灭活： 是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。 灭活病毒诱导法 2.原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活病毒诱导法 思考：19世纪30年代，科学家曾在肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？ 病人体内病毒等诱导多个 体细胞融合形成了多核细胞。 肺结核病人病理切片 灭活病毒诱导法 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞融合前的处理方法 诱导细胞融合的方法 细胞融合成功的标志 结果 意义 细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性 用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞 电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 再生出细胞壁 细胞核的融合 获得完整的杂种植株 形成杂交细胞 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 植物体细胞杂交与动物细胞融合技术的比较 5.融合过程 一、动物细胞融合技术 细胞膜融合 细胞质融合 细胞核融合 6.动物细胞融合完成的标志： 细胞核融合 7.意义： 突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 8.应用： ①研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等； ②利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 二、单克隆抗体及应用 (一)传统抗体制备的方法 缺点：产量低、纯度低，而且特异性差 反复注射某种抗原 浆细胞 多种 血清 抗体 多种 动物体内产生的特异性抗体的种类超过百万种， 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 单一 B淋巴细胞 细胞群 选择 克隆 产生 大量的 单一抗体 特点：体外不能无限增殖 科学研究与探索 动物体内产生的特异性抗体的种类超过百万种， 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 单一 B淋巴细胞 选择 科学研究与探索 骨髓瘤细胞 细胞群 克隆 产生 大量的单一抗体 融合细胞 (二)单克隆抗体 1.概念： 由单一B淋巴细胞克隆产生的特异性抗体 2.优点： 特异性强、灵敏度高、可大量制备 特点：能无限增殖但不能产生抗体 特点：既能无限增殖又能产生抗体 动物体内产生的特异性抗体的种类超过百万种， 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 单一 B淋巴细胞 选择 科学研究与探索 骨髓瘤细胞 细胞群 克隆 产生 大量的单一抗体 融合细胞 (二)单克隆抗体 动物细胞融合技术 动物细胞培养 3.制备过程 第一次筛选 多种杂交瘤细胞 (1)动物细胞融合 第一次筛选 在特定的选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 多种B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 培养骨髓瘤细胞 特定抗原 脾脏 B 瘤 瘤-瘤 瘤-B B-B 3.制备过程 (2)克隆化培养和抗体检测（动物细胞培养） 抗体检测 第二次筛选 杂交瘤细胞(多种) 克隆化培养 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 （分泌的抗体能和特定的抗原结合） ①克隆化培养原理： 细胞增殖 ②抗体检测 a.取上清液 b.原理：抗原-抗体特异性结合 ③第二次筛选： 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 （含有抗体） 3.制备过程 (3)体内