1.2.2微生物的基本培养技术课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

二 微生物的选择培养和计数 科学实例 寻找耐高温的DNA聚合酶 被广泛用于体外扩增DNA片段的 聚合酶链式反应（PCR） 思路： 耐高温的酶 耐高温生物体 高温环境 （eg热泉、火山口等） 寻找 寻找 美国黄石公园热泉 启示： 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 （eg耐寒微生物、石油分解菌、尿素分解菌、纤维素分解菌等） 实验室筛选的原理： 人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和PH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。 科学实例 选择培养基 选择培养基 鉴别培养基 伊红-美蓝指示剂 刚果红指示剂 选择培养基配方的设计 CO(NH2)2 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 讨论： 1.在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。 2.除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 如何确定选择培养基有选择作用？ 实验思路： 设置基础培养基（eg牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数均多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 微生物的选择培养 土壤取样 注意： ①一般要铲去表层土，取距地面3～8cm的土壤层； ②取土样的工具和纸袋在使用前都需要灭菌。 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g 梯度稀释菌液 101 102 103 104 105 106 107 滴加菌液 涂布器灭菌 注意： ①将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧； ②不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 培养与观察 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 注意：实验前最好将培养皿做好标记， eg组别、日期、稀释度等 稀释涂布平板法 微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 ——活菌计数法 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (1)原理 (2)统计原则 ① 一般选择菌落数为30～300的平板计数。 ② 在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 (3)计算 1.稀释涂布平板法 ——活菌计数法 请计算：4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为 。 1.1×108 (4)结果分析 统计的菌落数＜＜活菌的实际数目 原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 1.稀释涂布平板法 ——活菌计数法 2.显微镜直接计数法 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 (1)原理 对细菌等较小的细胞进行观察和计数 较厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。 2.显微镜直接计数法 (2)优点 快速、直观 (3)缺点 ①统计结果一般是活菌数和死菌数的总和 偏大 ②不适于对运动细菌的计数 归纳拓展《导》P77 探究·实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 5.进一步探究 CO(NH2)2 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 呈碱性，遇酚红指示剂呈红色 方法：在培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌周围会形成红色圈。 刚果红指示剂 纤维素 + 刚果红 红色复合物 纤维素酶 纤维二糖、葡萄糖等 方法：在培养基中加入刚果红指示剂，纤维素分解菌周围有透明圈。 不与刚果红反应 即不形成红色复合物 $