2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-2022-2023学年高中生物人教版选择性必修3

第2节 动物细胞培养 第2章 细胞工程 二 动物细胞融合技术与单克隆抗体 2 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞融合前的处理方法 诱导细胞融合的方法 细胞融合成功的标志 主要用途 意义 细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性 用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞 电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 再生出细胞壁 细胞核的融合 获得完整的杂种植株 主要用于制造单克隆抗体 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 ￭ 复习导入 ￭ 复习导入 1.什么是抗体？ 机体受抗原刺激后产生的，并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 2.抗体由哪种细胞分泌？ 机体感染病原体后，体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌抗体。 3.抗体主要分布在哪里？ 血清中。 早期获得抗体的方法 产量低 纯度低 特异性差 缺点： ￭ 研究背景 二 只分泌一种特异性抗体，且不能无限增殖。 动物体内 抗原 刺激 浆细胞 抗体 B细胞 增殖分化 抗原不纯 抗原不纯 单克隆抗体的制备 思考 如何获得大量的单一抗体呢？ 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 单一B淋巴细胞 细胞群 选择 克隆 产生 大量纯度高特异性强的抗体 注意：在体外培养条件下一个B淋巴细胞不可能无限增殖 有能无限增殖的细胞吗？ 1975年英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒的设想： 单克隆抗体的制备 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （能产生抗体） （能大量增殖） 融合细胞 （既能产生抗体，又能大量增殖） 米尔斯坦 科勒 由于发明了单克隆抗体的制备技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。 二 单克隆抗体的概念: 单个细胞 无性繁殖 化学性质单一，特异性强 单： 克隆： 抗体： 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 1.若细胞两两融合，有几种融合情况？ ￭ 思考与讨论 3.筛选出的杂交瘤细胞都能产生所需抗体吗？ 2.如何筛选出杂交瘤细胞？筛选出的杂交瘤细胞有何特点？ 4.过程中进行了几次筛选？目的是什么？ 5.如何利用筛选出的能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞得到大量单克隆抗体？ 单克隆抗体的制备过程 B淋巴细胞 多种 骨髓瘤细胞 诱导融合 将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 能产生抗体，但不能大量增殖 不能产生抗体，但能大量增殖 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 注射特定的抗原 培养骨髓瘤细胞 从脾中提取 目的：获得产生相应抗体的B细胞 单克隆抗体的制备过程 多种杂交细胞： 未融合的细胞 B-骨、 骨-骨、 B-B、 第一次筛选： 用特定的选择培养基 在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长 杂交瘤细胞： （既能迅速大量增殖，又能产生抗体） 第二次筛选： 克隆化培养、抗体检测 （可进行多次） 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 （分泌的抗体能与特定抗原结合） 每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞 克隆化培养 多孔细胞培养板 （能产生所需抗体的杂交瘤细胞） 得到的杂交瘤细胞一定是所需的吗？ 杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞 单克隆抗体的制备过程 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 （分泌的抗体能与特定抗原结合） 注射到小鼠腹腔内 体外培养 单克隆抗体 从细胞培养液中提取 从小鼠腹水中提取 （能产生所需抗体的杂交瘤细胞） 项目 腹腔培养 体外培养 优点 缺点 易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低 规模小，产量少 可大规模培养，大量生产 需要人为控制培养条件，成本相对较高 补充资料：如何进行第二次筛选获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞？ 多孔细胞培养板 阳性孔 抗体检测板 ★ 有限稀释法 每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞 侧面模拟图 克隆化培养一段时间 取上清液进行抗体检测 单克隆抗体制备过程中的相关考点总结 （1）该过程中应用到的技术_______________________________________ （2）原理_______________________________________ （3）注射特定抗原的目的______________________________________________ （4）诱导融合的方法______________________________________ 动物细胞特有的诱导融合方法为