3.2 基因工程的基本操作程序（第二课时）-【生物一起课件】高中生物选择性必修3同步PPT课件（人教版2019）

基因工程 的基本操作程序 BASIC OPERATING PROCEDURES FOR GENETIC ENGINEERING 3.2 | 第二课时 人教版选择性必修3 将目的基因导入受体细胞 Step 03 1.转化 目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。 受体细胞 稳定 表达 由于受体细胞有植物、动物、微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此，基因表达载体的构建也会有差别。 2.方法 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法、农杆菌转化法、基因枪法 显微注射技术 Ca2+处理法(感受态细胞法) 常用的受体细胞 大肠杆菌 土壤农杆菌 酵母菌 动植物细胞 枯草杆菌 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 花粉管通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。 用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中 1 我国科学家独创的一种方法 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 花粉管通道法 在植物授粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通过花粉管通道进入胚囊。 2 我国科学家独创的一种方法 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 农杆菌转化法 农杆菌中的微生物，自然条件下可侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单生活在土壤子叶植物没有侵染能力。农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 农杆菌转化法 质粒 细菌染色体 T-DNA 感染植物细胞后转入目的基因 质粒 T-DNA 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 目的基因 重组的Ti质粒 DNA连接酶 T-DNA 限制酶酶切 提取Ti质粒 农杆菌 导回农杆菌 农杆菌感染植物细胞 植物组织培养 T-DNA及其中的目的基因成功整合到植物染色体 农杆菌转化法示意图 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 猜测单子叶植物细胞为什么不适用农杆菌转化法？ 可能损伤时无法分泌酚类物质。 农杆菌转化法 双子叶、裸子植物 受损 伤口分泌酚类物质和糖类物质 吸引农杆菌向受伤组织集中 将Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)转移到被侵染的细胞中，并且将其整合到该细胞染色体DNA上。 激活Vir区基因，导致T-DNA加工和转移 【特点】易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 农杆菌转化法 农杆菌转化的具体方法 可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片_______________，然后_____________，并__________；受体细胞为_______ a b 与农杆菌共培养 筛选转化细胞 再生成植株 体细胞 可以将____直接浸没在________________中一段时间，然后培养植株并获得____，再进行_____、_____等；受体细胞为_______ 花序 含有农杆菌的溶液 种子 筛选 鉴定 受精卵 该过程经过__次拼接、__次导入 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 花粉管通道法 农杆菌转化法 农杆菌转化法流程图 两 两 第一次拼接 将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上 插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上（非人工操作） 第二次拼接 第一次导入 将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌 第二次导入 含目的基因的T-DNA导入受体细胞（非人工操作） Ti质粒 目的基因 含目的基因的重组Ti质粒 农杆菌 植物细胞 植物细胞 表现出新性状的植株 构建基因表达载体 转入 导入 目的基因插入植物细胞染色体DNA中 植物组织培养 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 显微注射法 将含有目的基因的表达载体采用显微注射仪显微注射到受精卵(卵细胞也还行)；受精后经胚胎早期培养，再移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 显微注射法 表达载体提纯 受精卵 胚胎 雌性动物的输卵管或子宫内 新性状的动物 显微注射 早期胚胎培养 胚胎移植 发育 受精卵全能性高，高度分化的体细胞全能性受到抑制 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 Ca2+处理法 用CaCl2处理大肠杆菌，增加细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入宿主细胞。 大肠杆菌 表达载体 感受态细胞 缓冲液 混合 吸收DNA，完成转化 Ca2+ 使大肠杆菌处于一种易于吸收周围环境中DNA分子的生理状态 溶于 重组 Ti质粒 吸收 感受态细胞 植物细胞