内容正文:
第35讲 基因工程及生物技术的安全性和伦理问题
1.概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的。2.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。3.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤。4.举例说明基因工程在农牧、食品及医药等行业的广泛应用改善了人类的生活品质。5.概述人们根据基因工程原理,进行蛋白质设计和改造,可以获得性状和功能更符合人类需求的蛋白质。6.举例说明依据人类需要对原有蛋白质结构进行基因改造、生产目标蛋白的过程。7.举例说出日常生活中的转基因产品。8.探讨转基因技术在应用过程中带来的影响。9.举例说出生殖性克隆人面临的伦理问题。10.分析说明我国为什么不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验。11.举例说明历史上生物武器对人类造成了严重的威胁与伤害。12.认同我国反对生物武器及其技术和设备的扩散。
考点一 基因工程的基本工具
1.基因工程概念
[深化拓展] 基因工程的理论基础
2.限制性内切核酸酶——分子手术刀
3.DNA连接酶——分子缝合针
(1)作用:将限制酶切割下来的DNA片段拼接成新的DNA分子。
(2)类型
常用类型
E.coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
来源
大肠杆菌
T4噬菌体
功能
只“缝合”黏性末端
“缝合”黏性末端和平末端
结果
恢复被限制酶切开的磷酸二酯键
[归纳总结] DNA连接酶、DNA聚合酶、限制酶和解旋酶
种类
作用底物
作用部位
形成产物
DNA连接酶
DNA分子片段
磷酸二酯键
重组DNA分子
DNA聚合酶
脱氧核苷酸
磷酸二酯键
新的DNA分子
限制酶
DNA分子
磷酸二酯键
含黏性末端或平末端的DNA片段
解旋酶
DNA分子
氢键
单链DNA
4.基因进入受体细胞的载体——分子运输车
在基因工程操作中,真正被用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
题型 基因工程的操作工具
1.如图为基因表达载体的模式图,下列叙述错误的是( )
A.构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶
B.终止子位于基因的下游,使翻译在所需要的地方停止下来
C.构建成功后可使目的基因在受体细胞中稳定存在,并遗传给下一代
D.抗生素抗性基因作为标记基因
答案 B
2.第三代疫苗——DNA疫苗是指将编码保护性抗原蛋白的基因(如图甲)插入到适宜的质粒(如图乙)中得到的重组DNA分子,将其导入人体内,在人体细胞内表达的产物可直接诱导机体免疫应答,且可持续一段时间。限制性内切核酸酶的切点分别是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析错误的是( )
A.构建DNA疫苗时,可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和质粒
B.图乙中只用EcoRⅠ切割后的质粒,含有2个游离的磷酸基团
C.用EcoRⅠ切割目的基因和质粒,再用DNA连接酶连接,只产生1种连接产物
D.抗原基因在体内表达时不需要解旋酶
答案 C
解析 质粒是环状DNA分子,其上只有一个EcoRⅠ的切点,因此被EcoRⅠ切割后,质粒变为线性双链DNA分子,因每条链上含有一个游离的磷酸基团,因此切割后含有两个游离的磷酸基团,B正确;从图甲看出,用EcoRⅠ切割目的基因后两端各有一个切口,与图乙中EcoRⅠ切口对接时,可有两种可能,即可产生两种重组DNA,C错误;基因表达包括转录和翻译,转录时不需要解旋酶,在RNA聚合酶的作用下,DNA即可解旋,D正确。
考点二 基因工程基本操作程序
1.目的基因的筛选与获取(第一步)
(1)目的基因
(2)筛选目的基因
(3)获取目的基因的方法
①人工合成目的基因
②通过构建基因文库获取目的基因
③常用PCR特异性地快速扩增目的基因
[归纳总结] DNA体内复制与体外复制(PCR技术)条件的比较
PCR技术
DNA复制
相同点
原则
碱基互补配对
条件
DNA母链作为模板、引物(体内引物RNA、体外引物DNA)、4种脱氧核苷酸为原料
延伸方向
新链都是从5′端向3′端延伸
不同点
解旋方式
90 ℃以上高温解旋
解旋酶催化
场所
PCR扩增仪
主要在细胞核
延伸用酶
耐高温的DNA聚合酶
DNA聚合酶
温度
控制温度,需要在不同温度下进行
体内温和条件
过程
结果
大量的DNA片段(目的基因)
形成完整的子代DNA
2.基因表达载体的构建(第二步)
3.将目的基因导入受体细胞(第三步)
细胞类型
方法
原理/操作步骤
植物细胞
花粉管
通道法
①可以用