2.2.2动物细胞融合技术和单克隆抗体 课件 2022—2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

2.2 动物细胞工程 动物细胞融合技术和单克隆抗体 请同学们快速阅读课本P48页回答以下问题 1. 什么是动物细胞融合技术（概念）？原理是什么？ 2. 所形成的杂种细胞有什么特点？ 3. 诱导动物细胞融合的方法有哪些？ 4. 动物细胞融合技术的意义和应用有哪些？ 1、概念： 2、原理： 与植物原生质体融合的基本原理相同 动物细胞融合也称________。是指_____或 ____ 动物细胞结合成一个细胞的过程。 两个 多个 细胞杂交 形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的 ____ 细胞，称为 ________ 。 3、结果 一、动物细胞融合技术 —细胞膜的流动性 杂交细胞 单核 4、诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 （动物细胞融合特有） 与植物原生质体融合的方法相同 1、什么是病毒的灭活 灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。 一、动物细胞融合技术 病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 2、灭活病毒诱导细胞融合的原理 5.动物细胞融合技术全过程： 动物细胞融合 动物细胞培养 动物细胞融合完成的标志？ 细胞核的融合 6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 诱导融合的方法 意义和用途 （六）植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 克服远源杂交的障碍， 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理（离心、振荡、电激）化学（ PEG ） 物理、化学方法（ PEG ） 灭活的病毒 制备单克隆抗体 一、动物细胞融合技术 1、传统抗体制备方法及缺陷 缺陷：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 不能无限增殖产生大量抗体 动物体内 抗原 刺激 浆细胞 抗体 筛选单一B细胞 增殖分化 抗原不纯 抗原不纯 二、单克隆抗体及其应用 １）体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上 ２）每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体 1、科学家发现： 单 克 隆 抗 体 如何获得大量、单一的抗体？ 体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖 2、需解决问题： 3、遗憾： 如何解决这一难题？ 二、单克隆抗体及其应用 一个B淋巴细胞 细胞群 抗体 克隆 9 问题２：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备 癌细胞 动物细胞融合 问题１：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 动物细胞融合 动物细胞培养 单克隆抗体 杂交瘤细胞 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 阅读课本P48-49,了解单克隆抗体的制备过程 一个大胆的猜想 1975年，米尔斯坦和柯勒 1984年，诺贝尔生理学或医学奖 用抗原注射小鼠 从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养 已免疫B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 多种杂交细胞 二、单克隆抗体及其应用 小鼠的脾脏中获取 2、单克隆抗体的制备过程 B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原的效应B细胞，并且效应B细胞有分泌针对这种抗原的特异性抗体的能力。它的特异性是针对一个抗原决定簇的。各种抗原的决定簇数目不同，如白喉类毒素有8个抗原决定簇，流感病毒有40多个抗原决定簇。 11 2 杂交瘤细胞 1 3 第一次筛选 多种杂交 瘤细胞 融合的细胞 骨髓瘤细胞 自身融合 B细胞自身融合 杂交细胞 1 3 2 未融合的B淋巴细胞 未融合的骨髓瘤细胞 二、单克隆抗体及其应用 置于选择性培养基上培养 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 12 克隆化培养 抗体检测 第二次筛选 (抗原-抗体杂交技术) 多种杂交瘤细胞 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性细胞 二、单克隆抗体及其应用 怎样二次筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞？ 将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个进行培养（克隆化培养） 一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体 上清液可与特定抗体 结合的培养孔为阳性孔 多孔细胞培养板 抗体检测板 阳性孔 13 注射到小鼠体内 体外培养 分离、提纯单克隆抗体 体内或体外培养 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 细胞培养工程师在工作 二、单克隆抗体及其应用 14 杂交瘤细胞 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 注射到小鼠腹腔内 （体内培养）