第一章 发酵工程-【晨读晚默】高二生物必背知识清单（浙科版2019选择性必修3）

第一章 发酵工程 1、 【灭菌消毒】 1． 灭菌方法： ①高压蒸汽灭菌法：工具：高压蒸汽灭菌锅 一般情况：121℃ 1kg/cm2灭菌20min 葡萄糖：115℃以上会焦化，112℃ 500g/cm2灭菌30min（也可以过滤灭菌） （拓展）根据灭菌物质的特点需要适当调整：温度、压强、灭菌时间 （拓展）高压蒸汽灭菌锅的使用注意事项： 高压蒸汽灭菌锅使用前要检查水位，高压蒸汽灭菌锅内水位不能过低。 锅内物品不能摆放太多，太密集，why？不利于蒸汽流动 灭菌的时间：开始：达到设定的的温度和压力时开始计时， 结束：打开排气阀，压力降到指针为0（大气压强时）结束 灭菌无法设定压力？未排除锅内冷空气 全部工作结束后，所有使用过得器皿、废弃物都必需通过高压蒸汽灭菌后再洗涤倾倒 ②过滤灭菌：工具：G6玻璃砂漏斗，（抽滤灭菌（更快）灭菌对象：微生物/酶/尿素 ③灼烧灭菌法：接种环、镊子 2． 消毒方法 ①紫外线：工具：紫外灯，原理：紫外线：波长256—266nm使菌体蛋白质、核酸变性 在超净工作台上紫外灯（紫外灯操作过程中关闭）+过滤风灭菌30min ②消毒剂：对象：涂布器：浸泡在75%酒精中，接种前灼烧，再冷却 外植体：洗涤灵浸泡2min—流水冲洗—75%酒精30s—10%次氯酸钠 10min/0.1%氯化汞5-7min—无菌水冲洗—消毒后在无菌纸/灭菌 培养基操作 【例】接种间、消毒间紫外线或药物熏蒸的方法进行消毒或灭菌 2、 【培养基】 ①菌落特征：大小、形状、颜色、粗糙程度、隆起程度 ②菌种扩大培养：将单菌落接种到液体培养基，摇床振荡培养/液体悬浮培养 （增加培养基中氧气的浓度，摇床的转速、温度可以调节） ③微生物计数方法：稀释涂布平板法（活菌计数 结果偏低：当2个或多个细胞连在一起时， 平板上观察到的只是一个菌落） 显微镜计数法（血细胞计数板，数上不数下，数左不数右） 平板划线法：无法计数 ④培养基功能：选择培养基、鉴定培养基 ⑤培养基种类：物理状态：固体培养基（含有琼脂，获得单菌落）、液体培养基(扩大培养) 成分：合成培养基（化学成分清楚）、天然培养基（便宜） 用来菌种保存：斜面培养基（固体斜面培养基）4℃冰箱（零上低温） ⑥培养基配置过程： 计算——称量——溶解（可用蒸馏水）——定容——调节pH——高压蒸汽灭菌（尿素、酶等物质过滤灭菌）——倒平板（冷却凝固后倒置）——接种（稀释涂布平板法，平板划线法）——倒置放置（防止皿盖上形成冷凝水滴落，污染培养基）——培养基废弃（高压蒸汽灭菌） 【例】培养基的配置需要在酒精灯火焰旁操作（x） ⑦培养基的成分： 1.微生物培养基成分：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子（维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶）， 2.细菌培养基成分：常用蛋白胨和酵母提取物来配置（细菌喜荤，中性偏碱） 实验室常用：LB培养基（水、氯化钠、蛋白胨、酵母浸膏） 3.霉菌培养基成分：添加蔗糖的豆芽汁或可溶性淀粉加无机物；（霉菌喜素，中性偏酸） 4.酵母菌：马铃薯蔗糖培养基 5.植物（MS培养基成分）：水、无机盐(大量元素、微量元素)、维生素、氨基酸、 蔗糖、植物激素类物质（可以改动：种类及比例） 6.动物：液体培养基成分：水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖、 动物血清、激素、抗生素 7.胚胎：液体培养基加入：水、无机盐、有机物、维生素、激素、氨基酸、核苷酸 动物血清、激素 8.单克隆抗体克隆化培养时，不加动物血清，因为动物血清中蛋白和其他大分子物质太复杂，影响单克隆抗体的分离和纯化 9.胚胎干细胞：液体培养基 加入：水、无机盐、动物血清、维生素、饲养层细胞（提供细胞分裂、增殖的营养细胞支持生长） 【例】酵母菌通常使用 麦芽汁琼脂 培养基（填牛肉膏蛋白胨、MS、麦芽汁琼脂） 使用 高压蒸汽 灭菌法灭菌 3、 【微生物的培养】 ①土壤微生物的培养：（菌种的分离纯化） 无菌水溶解—振荡—获取细菌悬液（取上清液）—稀释处理（制备一定浓度梯度菌液） ——接种（平板划线法/稀释涂布平板法（活菌计数—）——获得单菌落（实现菌种分离、筛选、鉴定） ②影印法的优点？保证同一菌落在不同培养基中接种的位置相同 ③微生物的育种：方法：诱变育种： 场所：可以使用超净工作台的紫外灯进行诱变育种 1． 【抑菌效果的检测】： 制备细菌悬液——制备高压蒸汽灭菌的滤纸圆片——将其浸泡抗生素——测定透明圈（抑菌圈）的大小 2． 【分离分解尿素的微生物—以尿素为唯一氮源的选择培养基—对照组：LB固体培养基】 尿素 + 培养基其他成分 （G6玻璃砂漏斗过滤灭菌） （高压蒸汽灭菌；琼脂糖做凝固