第三章 动物细胞工程-【晨读晚默】高二生物必背知识清单（浙科版2019选择性必修3）

动物细胞工程 第三章 动物细胞工程 1． 【动物细胞培养】 ①动物细胞培养原理：细胞增殖 ②动物细胞生长特点：贴壁生长、存在接触抑制（离体）、 液体悬浮培养（摇床的转速和温度可以调节） ③动物细胞培养基：添加动物血清/鸡胚浸出液（天然成分）、葡萄糖； 添加抗生素（确保无菌条件） CO2培养箱（CO2调节PH——5%CO2+95%空气）； ④动物细胞克隆：—来源单细胞—克隆后的细胞群是一个纯系，遗传性状均一、基因型一致、表现的性状相似。 ⑤动物细胞扩大培养：原代培养+传代培养（传代一次——细胞会分裂很多很多次） ⑥细胞系：有限细胞系 连续细胞系：连续传代的细胞——包括良性细胞系（保留接触抑制）和恶性细胞系 恶性细胞系能无限增殖，具有不死性，无接触抑制等特性 ⑦细胞株一般具有恒定的染色体组型，在连续传代中可能会发生遗传物质的改变，使遗传性状难以保持稳定 1个祖细胞——经过克隆培养——细胞株（遗传物质均一的细胞群） ⑧动物细胞悬液/单个动物细胞的制备：胰蛋白酶/胶原蛋白酶—动物细胞间存在胶原纤维（蛋白质） ⑨胚胎干细胞培养——添加动物血清+饲养层细胞（胚胎成纤维细胞：全能性高于体细胞） 【例】可以通过 液体悬浮培养/克隆 培养获得特定细胞系以实现产物的工业化生产。 【例】当细胞发生贴壁和接触抑制现象时,加入胰酶可使其脱壁分散,处理一段时间后添加血清以 终止酶解反应 。 【例】科研人员通过 大量培养特定的细胞系 实现转基因矮牵牛中重要次生代谢产物的工业化生产。 【例】)含有“敲入”序列的猪胚胎成纤维细胞在体外培养,为提高克隆成功率,可向培养基中添加血清和饲养层细胞、激素 (写2点),贴满瓶壁的细胞常用胰蛋白酶消化处理,以便进行 传代 培养。 (5)将含有“敲入”序列的猪胚胎成纤维细胞的细胞核导入去核的卵母细胞,在此之前,需要对猪胚胎成纤维细胞做特殊处理 营养限制性培养 ,以提高实验成功率。 2． 【单克隆抗体的制备】 ①最大优点：纯度高、可大量制备， ②应用时具有的特点：特异性强、灵敏度高的 制备B淋巴细胞悬液——不用加胰蛋白酶（因为淋巴细胞在体内悬浮生长） 过程：B淋巴细胞(选自小鼠脾脏)+骨髓瘤细胞(经过毒性筛选，缺少DNA辅助途径的瘤细胞) 动物细胞融合技术（灭活的仙台病毒/聚乙二醇） 第一次筛选:利用HAT选择培养基（自然选择）（瘤瘤、瘤B、BB、多细胞聚合体等细胞中） A:氨基蝶呤：叶酸的拮抗剂，阻断瘤细胞合成DNA 杂交瘤细胞 第二次筛选：抗原—抗体杂交（需要进行克隆化培养+抗体检测（可多次检测）） 产生特定抗体的杂交瘤细胞 动物细胞培养技术（不加动物血清——成分复杂）或小鼠注入腹腔（抽取腹水）体内培养 （小鼠需要注射免疫抑制剂：why？小鼠易于接纳杂交瘤细胞，避免免疫排斥） 体外培养法：将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞合成并分泌单克隆抗体，收集上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。 单克隆抗体（效应B细胞分泌） 【例】人体内抗体种类繁多，且抗体基因在细胞内一般成簇存在。获取人抗体基因可从效应B 细胞中提取出相应全部mRNA为模板，利用逆转录酶合成;或通过设计引物，利用PCR技术获得。 (6)途径一利用胚胎干细胞作为受体细胞，原因是胚胎干细胞具有发育的全能性特点。为让抗体基因只在嵌合鼠乳汁中表达，可将抗体基因与小鼠乳清酸性蛋白基因的启动子部位结合，构建出乳腺特异性表达载体。 (7)途径二将小鼠抗体基因剔除的目的小鼠自身的抗性基因不表达，只表达人的抗体是获得的抗体比途径一的抗体具有 特异性强、灵敏度高优点。 3． 【胚胎工程】 受精（精卵识别依赖于细胞膜表面的特异性相互识别的糖蛋白）：体内受精发生于输卵管 优良品种雌性（超数排卵技术——促性腺激素） （场所：输卵管、子宫角） 获得次级卵母细胞（培养到中期II） 与获能处理的精子（精子不能直接使用） 受精作用 受精卵 胚激活 胚胎体外培养技术—不同胚胎发育阶段需要不同营养物质（目前无全体外胚胎培养技术） 早期胚胎（囊胚期）——胚胎分割（获得更多相同胚胎） 胚胎移植技术（一般不会引起免疫排斥反应）场所：子宫 一般品种的受体雌性（同期发情处理——孕激素） 妊娠——妊娠率和产仔率受代孕母体的影响 个体 妊娠率和产仔率影响因素：代孕母体的发情特征明显、营养状况、激素水平、子宫内部的环境、疾病，胚胎移植时，胚胎要尽可能分散移植到两侧的输卵管或子宫角，使得胚胎均匀分布 【判断】内细胞团可以发育成成体的所有组织和器官？对 （拓展）胚胎发育过程中，囊胚期开始分化形成内细胞团和滋养层 试管动物涉及的技术：体外受精+胚