2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节 动物细胞工程 （动物细胞融合） 讲课人：涂梦婷 第二章 细胞工程 动物细胞融合 1、概念： 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 2、原理： 细胞膜具有一定的流动性 3、结果： 形成杂交细胞。（融合后形成的原来两个或多个细胞的遗传信息） 4、意义： 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 物理法：离心法、电融合法 化学法：聚乙二醇（PEG)融合法 生物法：灭活病毒诱导法 6、融合方法： 动物细胞融合 特有 5、过程： 细胞膜融合 细胞核融合 细胞质融合 完成的标志 灭活病毒诱导法 灭活：指用物理或化学手段使病毒失去感染能力（不感染细胞）， 但是并不破坏病毒的抗原结构（诱导细胞融合）。 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 植物体细胞杂交vs动物细胞融合 细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性 用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞 电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法 PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法 再生出细胞壁 细胞核的融合 获得完整的杂种植株 主要用于制造单克隆抗体 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 抗体 1、抗体是由什么细胞产生的？ 浆细胞（效应B细胞） 2、抗体是如何产生的？ 蛋白质 3、抗体的化学本质是什么？ 4、抗体主要分布在哪里？ 血清 5、一种浆细胞能产生几种抗体？ 一种 1抗原 传统抗血清 （所有抗体混合） 免疫 传统抗体的制备 缺陷：产量低、纯度低，特异性差。 动物体内 抗原 反复注射 浆细胞 抗体 B淋巴细胞 增殖分化 １）体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上 ２）每个B淋巴细胞（浆细胞）只分泌一种特异性的抗体 科学家发现： 单 克 隆 抗 体 如何获得大量、单一的抗体？ 体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖 需解决问题： 遗憾： 如何解决这一难题？ 一个B淋巴细胞 B淋巴 细胞群 单一抗体 大量繁殖 （克隆） 单克隆抗体 单个B细胞进行无性繁殖产生的化学性质单一、特异性强的抗体 动物细胞融合 杂交细胞 动物细胞培养 单克隆抗体 骨髓瘤细胞 （能无限增殖） 一种B淋巴细胞 （只分泌一种特异性抗体） 杂交瘤细胞 特点：既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体 1975年，米尔斯坦和柯勒 1984年，诺贝尔生理学或医学奖 单克隆抗体 注射抗原 多种B淋巴细胞 用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 细胞融合 多种杂交细胞 进行诱导融合后，培养基中会有几种细胞？ 思考1 5种 骨髓瘤+B细胞 骨髓瘤+骨髓瘤 B细胞+B细胞 B细胞(未融合) 骨髓瘤(未融合) 注射抗原 多种B淋巴细胞 用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 多种杂交细胞 用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长 杂交瘤细胞 （既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体） 选择培养基 1．DNA的合成有D途径和S途径两种途径，其中D途径是在叶酸的辅助下，由氨基酸等小分子合成核苷酸；S途径是利用酶，催化次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶脱氧核苷（T）生成相应的核苷酸。 2．已知氨基蝶呤（A）是叶酸的拮抗物；实验所用的骨髓瘤细胞缺乏S途径中的酶。 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞（A） 合成DNA D途径 （叶酸） S途径 （酶） D途径（叶酸） 氨基喋呤 A、B、AA、BB、AB1、AB2、AB3 HAT培养基--了解 注射抗原 多种B淋巴细胞 用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 多种杂交细胞 用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长 杂交瘤细胞 （既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体） 选择培养基 (第一次筛选) 筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞(阳性) 多轮次的克隆化培养和抗体检测 抗体检测的方法——抗原-抗体杂交技术 克隆化培养和抗体检测 每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞 96孔板培养和筛选 检测原理：抗原和抗体能够特异性结合 注射抗原 多种B淋巴细胞 用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中获取能产生特定抗体的B淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 多种杂交细胞 用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长 杂交瘤细胞 （既能迅速大量增殖