内容正文:
活动:探究DNA的复制方式
对 DNA 复制方式的推测
①提出问题:DNA以什么方式复制?
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回归课本:在构建DNA分子的结构模型时,沃森和克里克事实上已经提供了DNA分子的复制模式。
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沃森与克里克提出了DNA半保留复制的假说。值得注意的是,我们提出的这种碱基特异性配对方式,暗示着遗传物质进行复制的一种可能机制
②做出假设
红色:亲代母链
蓝色:后来合成
一新一旧
一全新
一全旧
全保留复制:新复制出的子代DNA分子直接形成,完全没有旧的部分。弥散性复制:新复制的子代DNA分子中新旧都有,但分配是随机组合的。
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活动:探究DNA的复制方式
1958年,美国生物学家梅塞尔森和斯塔尔
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已知:15N-密度较大,14N-密度较小
③演绎推理
如何区分母链和子链?
关键问题:复制后得到的子一代DNA和子二代DNA通常是随机混合在一起的,如何区分?如何分离?
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技术:同位素示踪+密度梯度离心
观察子代DNA离心后在离心管中的位置
利用同位素来区别母链和新合成的子链
15N
14N
含15N的DNA比含14N的DNA密度大,根据试管中DNA带所在的位置就可以区分亲代与子代的DNA了。
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DNA用同位素15N标记后进行氯化铯密度梯度离心,DNA悬停在与其等密度的部位。采用一定技术手段,可以将DNA显现出来,用以区分不同密度的DNA。
令不同密度的DNA分层形成不同的条带
密度梯度离心模拟实验
情况一:若为半保留复制
亲代
子一代
子二代
全重
全中
½轻
½中
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半保留复制的预测结果
情况二:若为全保留复制
全重
½轻
3/4轻
亲代
子一代
子二代
½重
1/4重
全保留复制的预测结果
情况三:若为分散复制
亲代
子一代
子二代
全重
全中
??
弥散复制的预测结果
④实验验证:
实验结果与半保留复制预测结果相同
Step1:将大肠杆菌放入去15NH4Cl为唯一氮源的培养液中培养若干代,使大肠杆菌的DNA都被15N标记。提取大肠杆菌中的DNA分子,进行密度梯度离心。
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问题1:该实验的实验材料为什么选择大肠杆菌,可以选择酵母菌或噬菌体吗?
繁殖速度快,约20min繁殖一代,易培养,DNA易提取
分裂快,约20分钟分裂一次
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问题2:大肠杆菌在含15N的培养液中生长若干代的目的是什么?
15N
15N
使DNA双链被15N标记
14N
14N
14N
记录离心后试管中DNA的位置
问题2:进行密度梯度离心的是大肠杆菌?
提取大肠杆菌的DNA,进行离心
在20min、40min等不同时刻收集大肠杆菌并提取DNA。将提取的DNA进行离心
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问题4:通过比较亲代DNA和子一代DNA的离心结果就足以判断DNA是半保留复制?
⑤得出结论:
DNA的复制方式为半保留复制
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问题5:该实验中大肠杆菌分裂3次后,离心管中的条带将怎样分布?
问题6:如果继续上述实验,还能不能得到在底部的DNA条带?
不能,两条母链只能分配到两个DNA分子中,因此只能得到在中部和上部的DNA条带。
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问题7:如果把每代的DNA分子用解旋酶处理后再进行离心,还可以判断DNA复制的方式吗?
不能判断:结果一样,无法区分
预期结果:变性后离心出现两个条带,分别位于离心管的上部和下部。不能,这样两种复制方式都是同样出现重链和轻链,结果一样,无法区分
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例题:1958年,科学家将DNA被15N全部标记的大肠杆菌(第一代)转入以14NH4Cl为唯一氮源的培养液中培养,分别取完成一次细胞分裂的细菌(第二代)和完成两次细胞分裂的细菌(第三代),提取其DNA并做离心和分析。下列叙述错误的是( )
A.该实验采用了密度梯度超速离心的方法
B.提取DNA后离心是为了排除蛋白质、RNA等含氮物质的干扰
C.探究DNA复制方式实验时,可用酵母菌作为实验材料
D.通过观察第二代细菌的DNA条带分布,无法判断DNA的复制方式
例题:(2018年4月·浙江学考)某研究小组进行“探究DNA的复制过程”的活动,结果如图所示。其中培养大肠杆菌的唯一氮源是14NH4Cl或15NH4Cl,a、b、c表示离心管编号,条带表示大肠杆菌DNA离心后在离心管中的分布位置。下列叙述错误的是( )
A. 本活动运用了同位素示踪和密度梯度离心技术
B. a管的结果表明该管中的大肠杆菌是在含14NH4Cl的培养液中培养的
C. b管的结果表明该管中的大肠杆菌的
DNA都是15N-14N-DNA
D. 实验结果说明DNA分子的复制是
半保留复制的
例题:细菌在15N培养基中繁殖数代后,使细菌DNA的含氮碱基皆含有15N,然后移入14N培养基中培养,抽取亲代及子代的DNA经高速离心分离,下图①~⑤为可能的结果,下列叙述正确的是( )
A.亲代的DNA应为①