1.2.2微生物的选择培养和计数 课件 2022—2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第一章 第2节微生物的基本培养技术及应用 第2课时：微生物的选择培养和计数 问题探讨 1.科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外扩增 DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA 聚合酶。1973年，科学家从美国黄石国家公园的 热泉中筛选出水生栖热菌，进而提取出耐高温的 美国黄石公园 DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于聚合酶链式 反应(PCR) 讨论：1.筛选水生栖热菌的思路是什么样的？ 耐高温的酶、 耐高温的生物体 高温环境（热泉、 2.为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？ 水生栖热菌能在70一80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下 不能生存。 一、 选择培养基 1.概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同 时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 2.类型 (1)利用改变培养条件进行选择培养。 7080℃的高一 分离耐高温的水生栖热菌 (2) 瀜用添加某种化学物质进行选择培养。 加川入青看素一分离酵母菌、霉菌等真菌 加高浓度食盐一一金黄色葡萄球菌 (3)利用营养缺陌进行选择培养。 不加碳源（含碳有机物）的培养基一→分离出目养型微生物 不加氮源的培养基 分离出固氮菌 尿素[C0(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业 生产中一种重要的氮肥 尿素分解菌分解尿素的原理： 脲酶 C0(NH2)2+H20 C02+2NH3 1.如果让你配制一种培养基，让土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方 该如何设计？ 培养基的配方中应含有微生物生长所需的营养要素碳源、氨源、水、无机盐等。由于绝大多数微生物都 能利用葡萄糖，分解尿素的细菌也能利用葡萄糖，可以用葡萄糖作为碳源，但是，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，在培养基中加入尿素提供氮源，使培养基具有了选择作用。该培养基以尿素作为唯一氮源， 只允许能以尿素作为氮源的微生物生长。 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 该培养基与普通培养基相比较，共同点是都认有机碳（如葡萄 糖)作为碳源，都有水和无机盐；不同点是该培养基以尿素作 为唯一氮源，使只有能以尿素作为氮源的微生物生长 稀释涂布平板法 生物学苑bL 废液料 二、微生物的选择培养 必须要对土样充分稀释后，然后将菌液涂布到制备好的选择 1.稀释涂布平板法：培养基上。 2.，稀释涂布平板法的操作过程 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清 液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 在火焰旁将10g土样加 入盛有90mL无菌水的 锥形瓶中，充分摇匀，90mL无菌水9ml无菌水 制成菌液。 2稀释涂布平板法的操作过程 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却 后，再进行涂布 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可 转动培养皿，使涂布均匀 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放 入恒温箱培养。 注意事项 (1)各操作细节要保证“无菌”。例如，移液管要经过灭菌。梯度稀释时，试 管口和移液管应在离火焰1~2cm处，涂布器要经过灼烧灭菌等。 (2)将涂布器浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒 精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 (3)操作中要注意防火。涂布结束后，应将一个未接种的培养基和一个已接种 的培养基放在一起培养，以检测培养基是否灭菌彻底。 稀释涂布平板法与平板戏划线法的比较 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 通过连续划线的操作，将 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同 聚集的菌种逐步稀释分散 希释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表 面， 进行培养，以得到单菌落 接种工具 接种环 涂布器 单菌落的获得 从最后划线的区域挑取 希释度合适，整个平板上都可找到单 落 用途 分离纯化菌种，获得单菌落 ①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数 接种效果图 相同点 ①都能分离纯化菌种：②都是在固体培养基上进行的