3.2基因工程的基本操作程序第2课时课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序（第2课时） 复习导入：基因工程的基本操作程序 1、目的基因的筛选与获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 含目的基因的表达载体只有进入受体细胞，并且稳定维持和表达，才能实现一种生物的基因在另外一种生物中的转化。 三、将目的基因导入受体细胞 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 导入受体细胞的方法 受体细胞类型（常用） ①花粉管通道法 ②农杆菌转化法（常用） 显微注射法 Ca2＋处理法 （又称感受态细胞法） 受精卵或体细胞 受精卵 原核细胞 1、 花粉管通道法（我国科学家独创） ②在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入囊胚。 ①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中 目的基因 目的基因 三、将目的基因导入受体细胞 三、将目的基因导入受体细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）转化： 目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。 受体细胞 稳定 表达 2、 农杆菌转化法（采用最多） ①能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力 ②Ti质粒的T—DNA可转移至被侵染的细胞，并将其整合到该细胞的染色体DNA上 （2）原理： （3）方法： ①将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株； ②可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液一段时间，然后培植植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等， 三、将目的基因导入受体细胞 Ti质粒 目的基因 构建 基因表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 （4）过程： 该过程经过____次拼接、____次导入 ①第一次拼接：_______________________________ ②第二次拼接：_______________________________ _______________________________ ③第一次导入：__________________________________ ④第二次导入：__________________________________ 将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上 农杆菌将插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上（非人工操作） 两 两 将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌 农杆菌含目的基因的T-DNA导入受体细胞 （非人工操作） 拓展 2、 农杆菌转化法（采用最多） 三、将目的基因导入受体细胞 3、 显微注射法 受精卵 注入 将含有目的基因的表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵发育 获得具有新性状的生物 三、将目的基因导入受体细胞 4、 导入微生物细胞 基因工程中，常用原核生物作为受体细胞。 1.繁殖快 2.体积小易于培养操作 3.多为单细胞，遗传物质相对较少 4.经济实用 优点 感受态细胞法（又名Ca2+处理法） 大肠杆菌 使细胞处于一种能够吸收周围环境中的DNA分子的生理状态 Ca2+处理细胞 感受态细胞 重组基因表达载体与感受态细胞混合 常用菌 转化方法 细胞吸收DNA分子 Ca2+：增加细胞壁的通透性 小结：将目的基因导入受体细胞的方法 种类 项目 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用 方法       受体 细胞       转化 过程 目的基因插入Ti质粒的T­DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA中→表达 目的基因表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→能吸收周围环境中DNA分子的生理状态细胞→重组的基因表达载体导入细胞中 农杆菌转化法 显微注射法 Ca2＋处理法 体细胞或受精卵 受精卵 原核细胞 当堂巩固 1. 研究人员将一种海鱼的抗冻蛋白基因加整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，然后用它侵染番茄细胞，获得了抗冻的番茄品种。判断下列相关表述是否正确。 （1）将加基因整合到Ti质粒上就是构建基因表达载体。（ ） （2） 构建含有加基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶和核酸酶。（ ） （3） 只要检测出番茄细胞中含有物基因，就代表抗冻番茄培育成功。 （ ） × × √ 当堂巩固 2、（2022春·黑龙江牡丹江·高二牡丹江市第二高级中学校考期末）基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质，下列叙述错误的是（    ） A．常用相同的限制酶处理目的基因和质粒（载体） B．DNA连接酶和限制酶是构建重组质粒必需的工具酶 C．重组质粒的构建需在大肠杆菌体内完成 D．将重组质粒导入大肠杆菌细胞用的是感受态