2.1微生物的实验室培养（第二课时）课件-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

课题一 微生物的实验室培养 概念 来源 作用 碳源 凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质 无机碳源 CO2 NaHCO3等 有机碳源 糖类（主要） 脂肪酸 石油等 ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源 （1）微生物的碳源 自养型和异养型微生物分别能利用哪类碳源物质？ 思考 2 概念 来源 作用 氮源 无机氮源 N2、NH4+、 NO3-、NH3等 有机氮源 尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸 等 凡是能够为微生物提供N元素的营养物质 主要用于合成蛋白质、核酸 及含N的代谢产物 （2）微生物的氮源 思考 哪些微生物能够利用氨气？ 氮源能否为微生物提供能量？ 3 请判断下列说法的正确性 同一种物质不能既做碳源，又做氮源。 碳源都能提供能量。 NaHCO3只能提供碳源。 无机氮源也能提供能量。 （二）无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止外来杂菌入侵。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 1）清洁和消毒 2）灭菌 3）酒精灯附近进行 4)避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触 1.注意事项： （二）无菌技术 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒 使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线30min消毒，照射前，可喷石炭酸或煤酚皂等消毒液加强消毒效果 (1)消毒的方法： 3.常用的消毒与灭菌的方法 1、灼烧灭菌： 接种环、接种针、试管口、瓶口 2、干热灭菌： 玻璃器皿和金属用具 3、高压蒸气灭菌： 100kPa、121 ℃下维持15-30min. (2)灭菌的方法： 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 旁栏思考 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 1. 器具的灭菌 2. 培养基的配制 3. 培养基的灭菌 4. 倒平板 5. 微生物接种 6. 恒温箱中培养 7. 菌种的保存 二、实验操作 二、实验操作 (一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌) 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL 1．计算 2. 称量 3．溶化（注意称量纸） 操作步骤 4．灭菌: 将培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅。 将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 5．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过快挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 1、平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落. （二）纯化大肠杆菌 微生物接种的方法： 平板划线法和稀释涂布平板法 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼