1.2.2 微生物的选择培养与计数 课件 2022—2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

项目 类型 适用范围 操作方法 消毒 灭菌 较为温和理化方法，杀死部分微生（不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 日常生活 100 ℃煮沸5～6 min 巴氏消毒法 不耐高温的液体 62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min 化学药剂 生物活体、水源等 擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源 紫外线 紫外线照射30 min 灼烧灭菌 接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 干热灭菌 耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等 物品放入干热灭菌箱, 160～170 ℃加热2～3h 湿热灭菌 培养基、培养皿等,生产和实验室常用 高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min 接种室、接种箱，超净工作台 消毒和灭菌的比较 1 微生物的基本培养技术及应用 第2节 第一章 发酵工程 第2课时 微生物的选择培养和计数 SW-PWF 一、选择培养基 PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。 1973年，科学家在美国黄石国家公园的热泉中筛选出耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。 1. 科学实例： 水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 (1)筛选原因： (2)启示： 3 一、选择培养基 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 2.实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 温泉 冰川 油田 4 一、选择培养基 3.选择培养基： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 分离酵母菌、霉菌等真菌(青霉素能杀死细菌、放线菌) 分离固氮微生物 分离自养型微生物 ④加高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 ⑤石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物 ③不加含碳有机物 ②不加氮源 ①加入青霉素 选择培养基的作用： 分离并计数某种微生物的数量（例如，能分解尿素的细菌）。 5 思考▪讨论 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。 讨论1： 如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来。 6 思考▪讨论 选择培养基配方的设计 讨论2： 该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 该培养基与普通培养基相比较，共同点是都以有机碳作为碳源，都有水和无机盐；不同点是该培养基以尿素作为唯一氮源，使只有能以尿素作为氮源的微生物生长。 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2)2 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基一 培养基二 培养基一的碳源为_______，氮源为_______；培养基二的碳源为_______，氮源为______ 牛肉膏 蛋白胨 葡萄糖 尿素 固体培养基 选择培养基 异养微生物 7 二、微生物的选择培养 对土样进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的培养基上，即可得到能分解尿素的细菌的纯培养物。 1.方法： 8 2.稀释涂布平板法的操作过程： 二、微生物的选择培养 (1)铲取土壤，将样品装入纸袋中。 (2)将10g土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的是试管中，依次等比稀释。 1mL 1ⅹ107 1ⅹ105 1ⅹ106 1ⅹ103 1ⅹ102 1ⅹ104 1mL 1mL 1mL 1mL 9mL无菌水 1mL 1mL 90mL无菌水 9 (3)取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 (4)将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 (5)将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养 (6)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 10 3.培养： 二、微生物的