1.2.2微生物的选择培养与计数课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

1.2.2微生物的选择培养和计数 1 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌( Thermus aquaticus)，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应(PCR)。 1.为什么水生栖热菌能更容易在热泉中找到并被筛选出来呢？ 这是因为水生栖热菌适应热泉的环境，能在 70~80 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 2.在自然界中，想进行微生物筛选的原则是什么？ 耐热微生物 耐寒微生物 石油分解菌 根据微生物对生存环境的要求，到相应环境中去寻找。 实验室中微生物的筛选，也可以应用同样的原理，即人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等) ，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 不加碳源的培养基 分离出自养微生物 分离耐热菌 70～80℃的高温 不加氮源的培养基 分离固氮微生物 加青霉素的培养基 分离真菌 一、选择培养基 加高浓度食盐 分离金黄色葡萄球菌 改变培养条件 添加某种化学物质 营养缺陷 尿素[CO(NH2)2] 尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥，尿素不能直接被农作物吸收，尿素施入土壤中，需要土壤中的细菌将尿素分解成NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物利用。 思考·讨论 选择培养基配方的设计 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 一、选择培养基 而这些细菌之所以能分解尿素是因为它们能合成脲酶。脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源 尿素[CO(NH2)2] 1. 如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 尿素作为唯一氮源 这种培养基与普通培养基相比，只是用尿素作为唯一氮源，其他营养成分基本相同。 思考·讨论 选择培养基配方的设计 一、选择培养基 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌? 2. 该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 二、微生物选择培养 通过对土样进行充分稀释，再将菌液涂布到制备好的培养基上，即可得到能分解尿素的细菌的纯培养物（单菌落）。 稀释涂布平板法 两个基本操作：梯度稀释和涂布平板 稀释涂布平板法的具体操作步骤? 稀释涂布平板法 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。 90mL无菌水 9mL无菌水 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 注意：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。 稀释10倍 梯度稀释 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 涂布平板 沥干 移液枪 稀释涂布平板法 培养与观察： 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。 稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外， 稀释涂布平板法 稀释涂布平板操作后分离得到单菌落 也常用来统计样品中活菌的数目。 三、微生物的数量测定——稀释涂布平板法 保证合理稀释度 统计的菌落往往比活菌的实际数目少 每克样品中的活菌数≈ 80 82 78 （ 80/0.1 ）×105 实际土样中活菌数目要 8×107 大于 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 2.同一稀释度至少对3个平板进行重复计数，求平均值（要分析3个重复值得差值大小） 尽量减少误差 每克样品中的活菌数≈(C÷V)×M C：平板上平均菌落数； V：涂布所用体积(mL)； M：稀释倍数。 1.选择30-300个菌落的平板进行计数。 3.涂布要均匀 三、微生物的数量测定——显微镜直接计数 是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。 也可选择用台盼蓝染色法来区分活菌和死菌。 还有其他的微生物计数法吗？ 三、微生物的数量测定——其他方法 当空气或者水样较为纯净，微生物浓度较低时，如何计数？ 滤膜法 比浊法 在一定范围内，菌液的浑浊度与菌的数量成正比 （不分