实验 DNA的粗提取与鉴定（教学课件）-【上好课】2022-2023学年高二生物同步备课系列（人教版2019选择性必修3）

实验：DNA的粗提取与鉴定 第三章 人教版 选择性必修3 1.提取DNA的原理 利用DNA与 、 和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性： 不溶于酒精，但某些_______ 溶于酒精。 (2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于 的NaCl溶液。 2.鉴定DNA的原理 在一定温度下，DNA遇 会呈现 。 RNA 蛋白质 DNA 蛋白质 2 mol/L 二苯胺试剂 蓝色 一 实验原理 第一步 第四步 第三步 研磨 加酒精析出 溶解与鉴定 称取约30g洋葱切碎，放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA 将丝状物或沉淀物溶于试管中的NaCl溶液中。然后，向试管中各加入4mL的二苯胺试剂鉴定（注意做对照实验） 第二步 提取上清液 研磨液过滤到烧杯中，置于4℃冰箱中，几分钟后，再取上清液（也可以通过离心处理后再取上清液） 二 实验步骤 二 实验步骤 称取 ，切碎，放入研钵，倒入 ，充分研磨。 在漏斗中垫上纱布过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取 ；或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取 。 在上清液中加入体积相等的、 溶液, 静置2~3min，溶液中出现的 就是粗提取的DNA 。 2.去除杂质—— 3.DNA的析出—— 1.破碎细胞—— 洋葱 研磨液 上清液 上清液 预冷的酒精 白色丝状物 思考：如何评价结果？ ——看提取物颜色 ——看与二苯胺反应颜色的深浅 DNA纯度 DNA的量 用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物；或将溶液倒入塑料离心管中离心，取沉淀物晾干。 析出DNA 二 实验步骤 将丝状物或沉淀物溶于 溶液中，加入 试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min 4.DNA的鉴定—— 二苯胺 2mol/L的NaCl 空白对照组： 在等体积的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min。 实验组 对照组 水浴加热 二 实验步骤 二 实验步骤 （1）选什么样的材料实验更易成功？用洋葱做材料，为什么要充分研磨？ （2）猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA的材料？操作时如何防止血液凝固？ （3）如果用鸡血动物细胞做材料，也需要研磨裂解释放细胞中的DNA吗？ 猪血（哺乳动物的成熟红细胞）无细胞核，不适合； 鸡血中红细胞有核DNA，且核DNA的量较多，适合。 含DNA的生物材料都可以，选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。 充分研磨，可以破坏细胞壁，裂解细胞，释放DNA。 加入清水，让细胞吸水胀破，释放DNA。 思考与讨论： 如果是猪肝呢？ 鸡血中加入柠檬酸钠，可防止血液凝固。 二 实验步骤 1、操作提示 (1)以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止__ 。 (2)加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧 ，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 血 DNA分子的断裂 液凝固 2、关键点拨 1.利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可 使其吸水涨破。 2.不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞 细胞核。 3.提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：体积分数为95%的冷酒精 更佳。 直接 无 提纯效果 三 操作提示与关键点拨 　(2022·天津耀华中学高二期中)下表关于DNA粗提取与鉴定实验的表述，不正确的是 例1 选项 试剂 操作 作用 A 研磨液 与生物材料混合 提取溶解DNA B 2 mol/L NaCl溶液 与提取出的DNA混合 溶解DNA C 冷却的酒精 加入到离心后的上清液中 溶解DNA D 二苯胺试剂 加入到溶解有DNA的NaCl溶液中 鉴定DNA √ 课堂总结 　(2022·北京东城高二期末)利用新鲜洋葱作为实验材料提取DNA时 A.可将洋葱置于清水中，细胞吸水破裂后将DNA释放出来 B.离心后上清液中加入75%冷酒精，出现的白色丝状物