第三章 探究-实践 DNA片段的扩增及电泳鉴定（课件PPT）-【状元桥·优质课堂】2022-2023学年新教材高中生物选择性必修3 生物技术与工程（人教版2019）

基因工程 第3章　 探究•实践　DNA片段的扩增及电泳鉴定 课时作业(十三) 目 录 Contents DNA的热变性 温度 解聚与结合 可解离 正电荷 负电荷 电场 相反 返回目录 生物学　选择性必修3 　 浓度 大小 构象 紫外 返回目录 生物学　选择性必修3 　 微量移液器 微量离心管 10 底部 PCR仪 返回目录 生物学　选择性必修3 　 大小 电泳缓冲液 0.8%～1.2% 核酸 凝胶载样缓冲液 微量移液器 1～5 V/cm 凝胶边缘 返回目录 生物学　选择性必修3 　 高压灭菌 －20℃ 缓慢 返回目录 生物学　选择性必修3 　 低 污染 过高 过低 返回目录 生物学　选择性必修3 　 课时作业(十三) 返回目录 生物学　选择性必修3 　 制 作 者：状元桥 适用对象：高中学生 制作软件：Powerpoint2003、 Photoshop cs3 运行环境：WindowsXP以上操作系统 一、实验原理 1．DNA片段的扩增 PCR利用了_____________________原理，通过调节______来控制DNA双链的_______________。 2．琼脂糖凝胶电泳 (1)带电粒子：DNA分子具有_________的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上_________或_________。 (2)迁移动力与方向：在______的作用下，带电分子会向着与它所带电荷______的电极移动，这个过程就是电泳。 (3)迁移速率：在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的______、DNA分子的______和______有关。 (4)检测：凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的______灯下被检测出来。 二、方法步骤 1．移液：用_______________按照配方或PCR试剂盒的说明书，在_______________中依次加入各组分。 2．混合：待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。 3．离心：将微量离心管放在离心机上，离心约______s，使反应液集中在管的______。 4．反应：将装有反应液的微量离心管放入____________中，设置程序进行反应。 5．根据待分离的DNA片段的______，用_______________配制琼脂糖溶液，一般配制质量分数为________________的琼脂糖溶液，并加入适量的______染料混匀。 6．将扩增得到的PCR产物与_____________________(内含指示剂)混合，再用_______________将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。 7．接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为_______________。待指示剂前沿迁移接近____________时，停止电泳。 8．电泳结束后，取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。 三、操作提示 1．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行____________处理。 2．缓冲液和酶应分装成小份，并在____________储存。使用前将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上，______融化。 3．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。 4．在进行操作时，一定要戴好一次性手套。 四、关键点拨 1．未出现扩增条带的主要原因 (1)TaqDNA聚合酶失活。 (2)引物出现质量问题。 (3)Mg2＋浓度过低。 (4)变性时的温度___ , 变性时间短。 2．出现非特异性扩增条带的主要原因 (1)模板DNA出现______。 (2)引物特异性不强或形成引物二聚体。 (3)Mg2＋浓度______。 (4)复性时的温度______等。 $