第2章第2节 动物细胞工程—动物细胞融合与单克隆抗体（课件）-2022-2023学年高二生物备课无忧（人教版2019选择性必修3）

运用植物体细胞杂交技术，可以打破不同种植物的生殖隔离，培育出新的作物类型。那么，有没有技术让不同种动物的体细胞杂交，培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢？ 第2章第2节 动物细胞工程 动物细胞融合技术与单克隆抗体 1.阐明动物细胞融合技术的含义。 2.说出单克隆抗体的制备过程和应用。 一、动物细胞融合技术 1.概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 4.结果： 形成杂交细胞。即融合后形成的原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 2.原理： 细胞膜的流动性 3.诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程： 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 ↓ 细胞膜被病毒颗粒穿通 ↓ 细胞膜连接 ↓ 细胞核融合，形成杂交细胞 5.过程： 一、动物细胞融合技术 6.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7.应用： 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 基本原理 融合前处理 诱导方法 用 途 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、果胶酶去壁 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散 培育新品种 制备单克隆抗体 物理法：电融合法、离心法 化学法：PEG，高Ca2+ —高PH融合法 电融合法，PEG融合法，灭活的病毒 植物体细胞杂交和动物细胞融合比较 抗原 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一B细胞 不能无限增殖产生大量抗体 缺陷：产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。 二、单克隆抗体及其应用 1.传统抗体制备方法及缺陷： 如何解决这个问题呢？ 动物细胞融合 杂交细胞 动物细胞培养 单克隆抗体 杂交瘤细胞 既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 1975年，米尔斯坦和柯勒实验 1984年，获诺贝尔生理学或医学奖 2.单克隆抗体制备原理： 二、单克隆抗体及其应用 注射特定抗原 从脾脏中获取B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 目的是获得产生特定抗体的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 与B淋巴细胞融合 诱导融合 3.过程： 二、单克隆抗体及其应用 骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 第一次筛选 多种杂交细胞 选择培养基培养 筛选杂交瘤细胞 杂交瘤细胞 既能迅速大量增殖 又能产生抗体 特点 二、单克隆抗体及其应用 3.过程： 杂交瘤细胞 第二次筛选 多孔培养板 筛选抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 克隆化培养和抗体检测 既能迅速大量增殖 又能产生特异性抗体 特点 二、单克隆抗体及其应用 3.过程： 在体外培养 注射到小鼠腹腔内 培养液中获取 从腹水中获取 单克隆抗体 获取单克隆抗体 二、单克隆抗体及其应用 3.过程： 诱导其融合的方法有哪些？ 注射抗原的目的是什么？ 大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法 两次筛选的目的 获得能产生相应抗体的B淋巴细胞 物理:电融合法化学:聚乙二醇 生物：灭活的病毒 第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选得到能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 B淋巴细胞 B淋巴细胞 注射抗原 骨髓瘤细胞 融合 B-B细胞 杂交瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择性培养基 筛选1 多种杂交瘤细胞 符合要求的杂交瘤细胞 抗原-抗体 杂交法 筛选2 克隆化 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 思考： B淋巴细胞 B淋巴细胞 注射抗原 骨髓瘤细胞 融合 B-B细胞 杂交瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择性培养基 筛选1 多种杂交瘤细胞 符合要求的杂交瘤细胞 抗原-抗体 杂交法 筛选2 克隆化 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 杂交瘤细胞特点 既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖 单克隆抗体制备中包括几个阶段？ 动物细胞融合、动物细胞培养 原理 细胞膜的流动性、细胞增殖 单克隆抗体的优点： 思考： (1)能准确地识别抗原的细微差异。 (2)与特定抗原发生特异性结合。 (3)可以大量制备。 4.单克隆抗体的应用 资料1 用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”。在妊娠第8天就可以作出诊断，这比原来的诊断方法提前了10d左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。 资料2 使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性， 在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体-药物