2.2 动物细胞的融合技术单克隆抗体-【轻松学生物】2022-2023学年高二生物同步教学精优课件（人教版2019选择必修3）

动物细胞的融合技术与单克隆抗体 植物组织培养 杂种细胞 番茄 A 土豆 B 植物体细胞杂交过程 正在融合的原生质体 原生质 体融合 再生 细胞壁 脱 分化 再分化 移栽 愈伤组织 幼苗 原生质体 原理是细胞膜流动性 杂种植株 A B 酶解 酶解 纤维素酶和果胶酶 物理 化学 离心、电融洽 聚乙二醇（PEG） 诱导方法 植物细胞融合 原理是细胞全能性 AB 2 1970年，科学家用红色荧光染料标记的人细胞与用绿色荧光染料标记的小鼠细胞进行细胞融合实验，证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的 细胞杂交技术的优势： 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞的优势于一身的动物细胞呢？ 动物细胞融合技术 1.概念： 2.诱导原理和结果： 原理 结果 使________________细胞结合形成_________的技术 细胞膜具有一定的流动性 两个或多个动物 一个细胞 具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞 细胞杂交是指不同基因型的细胞之间的融合 3.诱导融合的常用方法： 物理法： 化学法： 与植物原生质体融合的方法相同 生物方法： 灭活病毒诱导法 动物细胞融合特有 动物细胞融合完成的标志？ 细胞核的融合 思考1：何谓灭活病毒？ 用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。 思考2：灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？ 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 思考3：19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。如何解释这一现象？ 肺结核病人病理切片 病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 4.意义： 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 5.应用： （1）细胞融合技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段 （2）利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径 比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原 理 融合前 处理 诱导 方法 用 途 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理（电激、离心、振动） 化学（聚乙二醇） 理化法与植物相同 生物法用灭活病毒 获得部分 或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 单克隆抗体及其应用 如何产生抗体？ 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。 产量低、反应不够灵敏；特异性差、纯度低 这样产生的抗体有何特点？ 动物 B淋巴细胞 单一抗体 抗原 产生 要想获得大量单一抗体，须长期存活并克隆单一的B淋巴细胞成细胞群。如何解决这一难题？ 一个B淋巴细胞 （产生特异性抗体） 小鼠骨髓瘤细胞 （能无限增殖） 杂交 瘤细胞 米尔斯坦 科勒 俩人发明单克隆抗体制备技术而获得诺贝尔奖 既能产生大量抗体，又能大量增殖 细胞融洽 杂交瘤细胞 单克隆抗体的制备过程 注射特定的抗原 用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞 培养骨髓瘤细胞 从细胞库存中获取的骨髓瘤细胞通过体外培养大量增殖，但不能产生抗体 将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 诱导细胞融合的方法有？ 物理方法： 电融合法 化学方法： 聚乙二醇（PEG）融合法 生物方法： 灭活病毒诱导法 若只考虑细胞的两两融合，融合形成的细胞有几种？需要的是？培养液中共会出现几种细胞？ 3种 杂交瘤细胞 5种 融合的细胞3种；未融合的细胞2种 用特定的选择培养基进行筛选杂交瘤细胞 在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长 杂交瘤细胞特点： 杂交瘤细胞具备两种细胞的遗传物质，既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体 克隆化培养、抗体检测 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（分泌的抗体能与特定抗原结合） 能产生所需抗体的杂交瘤细胞进行第二次筛选 将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个进行培养（克隆化培养） 一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体 上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞产生抗体 将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖 从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体 思考1：单克隆抗体制备过程中两次筛选的原因有何差异？ 第一次要进行筛选的原因是诱导融合后得到3种融合细胞